色素辣椒InDel-PCR反应体系优化及引物筛选

为建立和优化色素辣椒的InDel标记PCR反应体系,筛选多态性良好且重复性高的引物,为InDel分子标记在色素辣椒辅助育种、品种纯度鉴定及遗传多样性分析等提供可靠的技术支持.采用正交试验、单因素试验方法,对影响扩增体系中的模板DNA用量、引物浓度、2×Taq PCR Mix添加量等参数进行3因素4水平的正交试验比较分析,对循环数进行单因素试验优化分析.结果表明,对InDel-PCR体系扩增结果的影响程度中引物浓度最大,其次是模板DNA用量,而2×Taq PCR Mix添加量的影响不大.根据检测结果,出于成本和模板DNA用量的考虑,确定最佳InDel-PCR反应体系(10μL):模板DNA用量为35 ng、引物浓度为0.5μmol/L、2×Taq PCR Mix添加量为5μL.扩增程序:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,退火30 s,72℃变性60 s,35个循环;72℃变性5 min;扩增产物在4℃保存.从240对InDel通用引物中最终筛选出14对适用于色素辣椒InDel-PCR候选引物.InDel标记是基于PCR的分子技术,选择适宜的引物及模板DNA浓度对扩增出清晰、稳定的条带很重要,优化后的10μL InDel-PCR反应体系及扩增程序,成功筛选出14条多态性较高的InDel引物,为后续的色素辣椒分子标记研究提供了可靠技术依据.     

基于InDel标记的新疆色素辣椒遗传多样性及聚类分析

利用杂种优势的方式有效提高作物产量和品质的先决条件是全面系统地掌握色素辣椒亲本的遗传背景,包括遗传差异、遗传距离等,从而可预见性地选育高产高抗杂交种.利用240对InDel引物对30份新疆色素辣椒地方材料的基因组DNA进行PCR扩增,利用软件Ntsys 2.10对电泳后的多态性条带进行聚类分析.本研究最终检测出23对特异性引物,将参试材料分为3类,有效区分出不同品种资源间基因的内部差异.InDel分子标记技术系统地评价了各资源间的遗传距离和亲缘关系情况,为杂交育种工作中选配亲本提供了一定的理论参考和指导.     

基于高压喷射注浆法的施工技术探讨

高压喷射注浆是在化学注浆的基础上发展起来的,主要是利用高压水射流的切割作用而应用于地基处理中的一种注浆方法。本文介绍高压喷射注浆法施工过程及原理,分析高压喷射注浆法在实际应用过程中出现的问题,研究针对这些问题所采取的措施方法及改进策略。     

盐胁迫对加工番茄叶片番茄红素β-环化酶基因表达量的影响

以加工番茄品种"石红305"、"里格尔87-5"以及"LA2711"为试材,采用半定量RT-PCR法初步检测了不同浓度盐胁迫下加工番茄叶片中番茄红素β?环化酶(Lyc-β)基因的表达水平,以期探索盐胁迫对加工番茄类胡萝卜素代谢影响的分子机理。结果表明:一定范围的盐浓度可以上调或下调Lyc-β基因的表达,且随着盐浓度的增加,不同加工番茄品种叶片中Lyc-β基因的表达量呈现不均一变化,这可能与品种的基因型以及耐盐性有关;利用HPLC方法对相应叶片中β?胡萝卜素含量进行测定后发现,Lyc-β基因的表达与β?胡萝卜素含量的变化相符,这也在一定程度上说明盐胁迫可通过调控Lyc-β基因的表达量来影响β?胡萝卜素的代谢。     

7种杀菌剂对3种林木腐烂病菌的毒力测定及活性评价

林木腐烂病是苹果树、梨树和杨树等林木枝干的重要真菌性病害。为了筛选出对苹果树腐烂病菌Valsa mali var. mali、梨树腐烂病菌V. mali var. pyri和杨树腐烂病菌V. sordida等3种不同寄主腐烂病菌都能有效防控的杀菌剂,本研究开展室内毒力试验比较了7种杀菌剂对3种腐烂病病原菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制效果,并进一步通过田间活性测定试验比较7种杀菌剂对梨树腐烂病病斑扩展和分生孢子发生的防治效果,同时测定了增效剂8.6%聚乙二醇(PEG)对7种杀菌剂的增效作用。毒力测定结果表明,苯醚甲环唑、戊唑醇、吡唑醚菌酯和丙唑·多菌灵对3种腐烂病病原菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制作用较强,其中EC50平均值最低的是苯醚甲环唑,而戊唑醇的MIC平均值最低,在0.33 mg/L浓度下对3种腐烂病病原菌的菌丝生长和分生孢子萌发抑制率均达到100%。田间试验结果表明,45%苯醚甲环唑SC、43%戊唑醇SC和35%丙唑·多菌灵SE对梨树腐烂病病斑扩展和分生孢子萌发的防治效果突出,其中45%苯醚甲环唑SC 30.00 mg/L对病斑扩展防治效果达到82.23%,孢子萌发抑制效果达到85.96%,田间防治效果最好。10%丙硫唑SC+8.6% PEG处理组对病斑扩展防治效果提高了15.39百分点,达到73.46%,分生孢子萌发抑制率提高了23.75百分点,达到83.06%,增效作用显著。本研究为苹果树、梨树和杨树等3种寄主腐烂病的化学防控提供了科学依据。     

小拟南芥HDG12基因的克隆、生物信息学分析及植物表达载体的构建

以小拟南芥基因组DNA为模板,运用同源克隆法获得小拟南芥HDG12基因,命名为Ap HDG12。运用生物信息学方法,对Ap HDG12基因的理化性质、保守序列、二级结构、亚细胞定位等进行了分析,并进行同源建模。经测序和生物信息学软件预测分析,结果显示,Ap HDG12基因由10个外显子和9个内含子组成,mRNA长度为2 064 bp,编码687个氨基酸,亚细胞定位于细胞核。系统进化树显示Ap HDG12与Capsella rubella遗传距离最近,CDD保守序列分析结果显示Ap HDG12有18~79位的同源异型域和206~436位的START结构域,属于HD-zipⅣ类基因家族,同时构建了植物表达载体p BI121::HDG12,转化到农杆菌GV3101中,为进一步研究基因功能奠定基础。