膜联蛋白A2在肿瘤发生发展中的作用

膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)是膜联蛋白家族中的一种钙依赖多功能磷脂蛋白,其在胞吐、内吞、离子通道电导等过程中发挥关键作用。ANXA2也是自身免疫疾病、糖尿病等疾病的发生中发挥重要功能的蛋白,并与恶性肿瘤的发生有着紧密的联系。大量试验结果显示ANXA2在肿瘤组织中异常表达,因此,研究人员将目光转至ANXA2在肿瘤发生机制中的作用研究,但其参与肿瘤发生的机制尚不明确。本文就ANXA2的结构功能以及其在肿瘤中的作用机制进行综述,为对其作为一种新兴的生物标志物以及治疗恶性肿瘤的潜在靶点作更深的了解提供参考。     

ANXA2真核表达载体的构建

以膜联蛋白A2(Annexin A2,ANXA2)真核表达载体的构建过程为基础,介绍一种易于成功构建真核表达载体的方法。以Hela细胞来源的cDNA为模板,半套式PCR为基础,通过两次PCR的方法,可获得5’端添加Kozak序列并融合表达HA标签基因和ANXA2的基因片段Kozak-HA-ANXA2,回收后克隆到pMD-18T克隆载体,获得合适的酶切位点,再采用双粘端连接法将其克隆入慢病毒真核表达载体pTRIP中。结果显示,经双酶切和测序之后确定真核重组载体pTRIP-HA-humANXA2构建成功。通过半套式PCR方法构建真核表达载体成功率高,为下一步细胞表达试验创造条件。     

发动蛋白在EMCV感染Hela细胞中作用的研究

脑心肌炎病毒(EMCV)是一种重要的人畜共患传染病,给养猪业造成了巨大的经济损失,发动蛋白(Dynamin)是一种与内吞途径有关的蛋白,可以为多种内吞途径提供动力。为了检测发动蛋白在EMCV感染Hela细胞中作用,用发动蛋白的特异性抑制剂作用于Hela细胞后,再用EMCV感染Hela细胞,检测细胞内EMCV结构蛋白VP1含量和上清的病毒滴度、病毒拷贝数。VP1含量、病毒滴度和病毒拷贝数结果均提示经发动蛋白的特异性抑制剂作用后EMCV感染Hela细胞受到抑制。     

不同月龄新西兰兔肝中差异蛋白质鉴定与验证

兔出血症是由兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus, RHDV)引起的一种兔急性、高度致死性传染病，成年兔死亡率超过90%,但2周龄幼兔不发病。基于幼年兔与成年兔对RHDV的易感性差异，采用串联质谱标记(tadem mass tags, TMT)蛋白质组学技术对幼年兔(2周龄)和成年兔(6月龄)肝中的蛋白质进行检测和定量分析，从幼年兔和成年兔肝中定量获得4 353个蛋白质，筛选出821个差异蛋白质；相较于幼年兔，成年兔肝中294个蛋白质显著上调，527个蛋白质显著下调。GO功能富集分析结果显示，生物学过程主要富集到145个小分子代谢蛋白质、111个与氧化还原过程相关的蛋白质和478个参与代谢过程的蛋白质，细胞组分主要富集到528个细胞外成分蛋白质、139个线粒体蛋白质和366个细胞质蛋白质等，分子功能主要富集到342个催化活性蛋白质、93个氧化还原活性蛋白质和50个辅酶结合蛋白质等。821个差异蛋白质在KEGG Pathway数据库中共注释到47条KEGG信号通路，主要涉及代谢途径、糖代谢、氧化磷酸化作用和剪切小体等通路。幼年兔和成年兔肝中差异...