一个CRISPR/Cas9-VQR基因编辑系统的构建

CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术,但该编辑系统的使用范围受PAM (proto-spacer-motif)位点NGG的限制。本研究通过突变Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9)编码氨基酸(1135位的天冬氨酸D突变成缬氨酸V, 1335位的精氨酸R突变为谷胱氨酸Q, 1337位的苏氨酸T突变为精氨酸R,命名该突变子为Cas9-VQR)改造其识别PAM为NGA的位点以扩大其使用范围。并使用玉米Ubi启动子启动Cas9-VQR基因、优化SpCas9的密码子、加入保守的核定位信号序列、增加单子叶植物中保守的3′UTR序列和使用水稻U6启动子启动gRNA来修饰该编辑系统。结果表明Cas9-VQR系统能够识别PAM为NGA的位点,并进行有效的切割。体外酶切活性检测结果表明Cas9-VQR的切割效率为5%～70%。水稻转化检测结果表明Cas9-VQR的切割效率约为27.5%～70.5%,平均切割效率为46.23%。本研究拓宽了CRISPR/Cas9系统在作物中的使用范围,特别是NGA PAM位点较高的作物。     

猪附红细胞体病的诊治

近年来 ,金乡县各种年龄猪发生以皮肤潮红或苍白 ,高热不退 ,经多种抗菌、抗病毒及退热等药物治疗无效 ,病程较长的一种急性传染病。本病通常夏季传播流行 ,病死率高 ,给养猪生产带来严重危害 ,经临床检查和实验室检查 ,诊断为猪附红细胞体病。1　发病情况及临床症状该病自 5月份开始出现流行 ,至 7、8月份到达发病高峰。本病多发生于 7～ 9月 ,气温 2 0℃以上 ,湿度 70 %左右。气候干旱少发生。各种年龄、品种的猪都易感染发病 ,病程 1～ 3周不等 ,主要表现突然发病 ,食欲下降或废绝 ,体温 40～ 42℃ ,呈稽留热。精神沉郁 ,粪便干结 ,有时…     

非典型新城疫的防治

近几年来,免疫鸡群发生以呼吸道症状和神经症状为主,病理变化不典型,死亡率低的非典型新城疫已成为养鸡业的突出问题。1临床表现非典型新城疫发生在免疫鸡群,以30～50日龄的肉仔鸡和100～250日龄的蛋鸡常见。雏鸡最初以呼吸道症状为主,其后表现出新城疫的神经症状:震颤、跛行、病鸡体温升高、精神不振、离群呆立、羽毛松乱、缩颈闭眼、冠髯青紫,倒提,鸡从口内流出大量淡黄色酸臭粘液,采食减少或废绝、下痢、粪便呈黄绿色或白色水样,发病的产蛋鸡群,生长不良、消瘦瘫痪、产蛋鸡产蛋量缓慢下降,蛋壳质量变差、褪色、产白壳蛋、软皮蛋,产蛋率回…     

小麦抗/感白粉病近等基因系基因表达差异的研究

采用cDNA-AFLP(cDNA-amplified fragment length polymorphism)技术,对小麦抗白粉病近等基因系Mardler/7*百农3217和百农3217材料的不同处理,于接菌后不同时间点的基因表达进行了表达分析。Mardler/7*百农3217及其感病轮回亲本百农3217在表达上存在差异;利用46对引物在抗/感近等基因系和感病轮回亲本DCINA处理发现283条差异带,对其中42条片段进行克隆测序,同源性分析发现包括信号转导相关的基因片段、与细胞壁的组成和结构相关的基因片段和与过敏性反应相关的基因片段。此研究结果发现其中的一些差异显示片段对小麦的抗白粉病机理的揭示具有重要作用。     

植物多倍化过程中小分子RNA调控基因表达机制研究进展

多倍体在植物界中广泛存在,因其往往具有显著超出双亲的生长优势和适应性而成为植物学研究的热点之一。越来越多的研究表明小分子RNA介导的基因激活或沉默及染色质修饰在植物多倍化过程中的基因表达调控方面发挥重要作用。本文结合本实验室在小麦多倍化研究中的观察,着重综述近几年来小分子RNA层面的植物多倍化过程中基因表达调控的机制,以期对多倍体作物的研究和利用提供有益的借鉴。     

小麦脂质转运蛋白cDNA结构及相应肽链构造特征的分析

根据测序获得的1条261 bp cDNA片段,通过电子延伸、设计引物,从小麦Mardler/7*百农3217(Pm2)的cDNA中扩增获得1条651 bp的cDNA片段,通过同源比对发现其包含小麦LTP1 完整的编码序列.该片段包含基因的5'非翻译区42 bp,3'非翻译区261 bp,开放阅读框348 bp,编码115个氨基酸.预计蛋白的分子量为11.2 kD,等电点为9.46.此基因有8个位置保守的半胱氨酸(C)残基及25个氨基酸的信号肽,为典型的植物脂质转运蛋白基因.其基因序列数据库(GenBank)登录号为AY796184(基因)和AAV65513(蛋白).通过疏/亲水性分析,发现肽链分子具有较大范围的疏水面.     

AFLP分子标记与作物改良

建立了于ＤＮＡ基础之上的分子标记对于作物改良具有重要作用，ＡＦＬＰ（Amplified fragment length polymorphism，简称ＡＦＬＰ）国内译为扩增片段长度多态性，是一种ＤＮＡ分子标记技术。利用 一方法，在不需要预先知道ＤＮＡ序列住处的情况下，可以同时进行多数ＤＮＡ酶切片断的ＰＣＲ扩增，目前该技术不仅在小麦、玉米、棉花和大豆等主要农作物上得以应用，而且在蔬菜（番茄、马铃薯、鹰嘴豆等）以植物基因组研究的模式植物拟南芥上广泛应用。讨论ＡＦＬＰ在主要作物的品种鉴定、遗传多样性分析，遗传作图，基因定位以及辅助选择等方面的应用进展。     

6-苄基氨基比林、激动素对水分胁迫条件下小麦旗叶光合磷酸化活力的影响

干旱胁迫对抗旱性不同的两个小麦品种冀麦３８号和晋麦３３号的旗叶叶绿体Ｈｉｌｌ反应活力、光合磷酸化活力以及叶绿体偶联因子ＡＴＰ酶活力均有不同程度的影响,而叶面喷施６－苄基氨基比林或激动素,对以上两种反应及Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶均起到促进作用。     

6-BA或KT对水分胁迫条件下小麦旗叶光合能力及千粒重的影响

在田间防雨旱棚条件下研究了 6 -苄氨基嘌呤 (6 -BA)和激动素 (KT)对水分胁迫下不同抗旱性小麦品种旗叶光合能力的影响。小麦花后 3d ,土壤自然干旱的同时 ,叶面喷施 10 μmol·L-1的 6 -BA或KT均能提高旗叶的叶绿素含量 ,延长叶绿素含量缓降期 ;同时能提高旗叶的光合速率 ,延长光合速率高值持续期 ,增加叶源量 ,从而提高千粒重