新型圆环病毒—PCV3研究进展及展望(2017)

正2015年6月,美国北卡罗来纳州一个商品猪场母猪群暴发皮炎肾病综合征(PDNS),发病期间,该场母猪死亡率较历史平均水平增加了10.2%,受胎率减少了0.6%,窝均木乃伊胎相比历史平均水平增加1.19%~([1]),流产出的木乃伊胎大小不一(图1)。临床上,感染母猪厌食,皮肤多处出现丘疹性皮炎(图2);组织结构上观察,皮肤损伤以急性坏死性皮炎为特点;肾皮质区肾小     

猪PHGPx基因真核表达重组质粒的构建与鉴定

从猪睾丸中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）方法获得PHGPxcDNA。扩增的目的基因片段经琼脂糖凝胶电泳回收,与pMD18-T载体连接,转入E．coli DH5α中筛选鉴定重组子。将质粒经酶切鉴定后,把酶切下的目的基因cDNA进一步克隆到真核表达载体pGAPZ旺A中,经PCR及序列鉴定,证实插入载...     

猪流行性腹泻病毒HB/HEBEU/2020株全基因组遗传变异与重组分析

【目的】了解猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的基因组特征及变异规律。【方法】以3只发病仔猪小肠病料作为模板,采用RT-PCR技术检测病原。以检测阳性的肝脏组织RNA为模板,进行RT-PCR,分段扩增PEDV全基因组,使用DNAStar软件对PEDV基因组测序结果进行剪辑、拼接和相似性分析,利用Mega X 10.0.5软件对PEDV基因组和S基因进行遗传进化分析;利用RDP4软件对PEDV基因组进行重组分析。【结果】PCR检测结果表明,3只病仔猪的小肠组织均检测到PEDV阳性。采用RT-PCR分段扩增成功获得1株PEDV全基因组序列,命名为HB/HEBEU/2020株,基因组大小为28 038 bp,含有7个开放阅读框,从5'到3'依次为复制酶1a基因、复制酶1b基因、S基因、ORF3基因、E基因、M基因和N基因。相似性分析结果显示,HB/HEBEU/2020与SNJ-P、USA/Colorado/2013和HB2018等变异毒株全基因组和S基因的相似性均较高,分别为97.8%~99.3%和95.7%~98.8%,在所有市售疫苗株中,与变异型疫苗株AJ1102毒株全基因组和S基因的相似性分别为98.3%和97.3%;遗传进化分析结果显示,21株PEDV可划分为G1群和G2群2个分支,G1群进一步分化为G1a亚群和G1b亚群,G2群进一步分化为G2a亚群和G2b亚群,HB/HEBEU/2020属于G2a亚群。在G2群内,所有流行株均为2010年后出现,HB/HEBEU/2020与市售疫苗株AJ1102遗传距离较近,其次是LW/L,与CV777和attenuated CV777株遗传距离较远;经重组分析,HB/HEBEU/2020基因组可能为重组毒株,存在3个潜在的重组事件,重组事件1~3的断点分别为15 918—22 119、100—734和2 214—2 729 bp,其中重组事件1和2发生概率较大。【结论】HB/HEBEU/2020为1株变异型PEDV,与以CV777为代表的经典毒株亲缘关系较远,与2010年后中国发生的变异型毒株亲缘性较近,并且存在潜在重组事件。本研究结果可为调研中国当前PEDV进化和变异提供重要资料,为遏制PEDV蔓延与进化、制定合理防控方案提供理论和现实依据。     

鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。     

猪呼吸道疾病综合症病原谱分析及防控原则

猪呼吸道疾病综合症(Porcine respiratory disease complex,PRDC)由多种因素综合作用而引起,发病率高,给集约化生猪养殖造成了巨大的经济损失。通过对美国、丹麦、中国近几年的PRDC病原调查进行总结,发现在不同国家、不同地区,不同品种猪的PRDC病原谱存在差异。其中圆环病毒2型、蓝耳病病毒、猪流感病毒、肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌是我国PRDC的主要病原,通过对5种主要病原致病机理的概括分析,绘制了PRDC发病机理图,并针对PRDC的防控提出了6点建议。     

试论水利工程建设现代化的管理

随着科学技术的发展,传统的人工管理已经不能满足水利工程建设的要求,以先进的信息化技术为主的管理方式盛行起来。计算机自动化系统可以对水利工程进行综合性的调整,保证它的整体性能。现代化的管理方式对水利工程的建设意义重大,由此可见,水利工程现代化管理的探讨已经成为一个重大课题。     

东北-黄淮海平原旱作区作物秸秆养分资源量 及还田替代化肥潜力

东北-黄淮海平原旱作农业区（旱作区）是中国重要的粮食产区,估算旱作区主要作物秸秆养分和化肥替代潜力,可为该区域秸秆养分资源的合理利用和秸秆还田条件下化肥减施提供科学依据。基于2015—2018年统计年鉴数据,对旱作区各市小麦、玉米和大豆3种作物秸秆养分资源量和利用潜力进行分析。结果表明：小麦、玉米和大豆累积播种面积占旱作区作物播种面积的81.49%;作物秸秆资源年均产量分别为9 432.24万t（小麦）、13 485.91万t（玉米）和732.94万t（大豆）,占全国相应作物秸秆资源总量的70.96%、51.63%和42.34%。秸秆养分总量为678.60万t,包含167.75万t（N）、67.12万t（P₂O₅）和443.73万t（K₂O）,累计占该区域三大作物推荐施肥总量的53.75%。秸秆还田模式下,小麦、玉米和大豆秸秆当季替代化肥（N+P₂O₅+K₂O）潜力分别为188.88、138.71和38.51 kg·hm^-2。小麦主要种植区（黄淮海平原）小麦秸秆可实现N 16.15 ~ 30.11 kg·hm^-2,P₂O₅ 7.89 ~ 14.71 kg·hm^-2,K₂O 112.18 ~ 209.16 kg·hm^-2的化肥替代;玉米主要种植区（东北平原）玉米秸秆可实现N 20.39 ~ 39.85 kg·hm^-2,P₂O₅ 10.39 ~ 20.31 kg·hm^-2,K₂O 66.60 ~ 130.18 kg·hm^-2。可见旱作区秸秆还田替代化肥潜力较大。     

鸭出血性卵巢炎广东病例报道及其RT—PCR方法的建立

本文对广东省内9个白鸭种蛋鸭场发生的鸭出血性卵巢炎症状、病变、流行情况进行了报道,并建立能从病死鸭肝脾组织直接进行特异性RT-PCR的快速检测方法。     

长期施肥下旱地红壤剖面磷素的形态变化与累积特征

依托长期(1989―)定位试验,田间试验设置5个处理:氮磷钾(NPK)、氮磷钾+花生秸秆(NPK+PS)、氮磷钾+绿肥(NPK+FR)、氮磷钾+腐熟猪粪(NPK+PM)、只施氮钾(CK),研究不同施肥措施对旱地红壤剖面磷素形态变化与累积特征的影响.结果显示:长期施磷肥显著增加红壤中全磷和速效磷的含量,提升土壤磷活化系数...     

河北省及周边地区猪圆环病毒2型的遗传变异与重组分析

为了监测河北省及周边地区猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV-2)的流行性和遗传变异性,试验采集河北省及周边地区猪场疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合征(PCVAD)仔猪的组织病料,提取DNA,采用PCR方法进行PCV-2全基因组扩增、克隆和测序,采用DNAStar软件对PCV-2测序结果进行剪辑、拼接和同源性分析,利用MEGA X 10.0.5软件对PCV-2基因组进行遗传进化分析,利用RDP4软件对PCV-2基因组进行重组分析。结果表明：成功扩增并克隆出6株PCV-2毒株的基因组序列,6株分离株分别为河北沧州株HB/NG/2020(OM524507)、HB/WT/2020(OM524511)和HB/CZ/2020(OM524512),河北邯郸株HB/WA/2020(OM524508),河北邢台株HB/ZZ/2020(OM524509)及内蒙古乌兰察布株NMG/QQ/2020(OM524510);经测序和全长拼接,PCV-2基因组长度均为1 768 bp。经同源性分析,6株PCV-2毒株基因组核苷酸序列的同源性为97.8%～100%,与4株国产疫苗参考株LG、Z...