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杂草稻nrDNA ITS片段的PCR扩增条件优化及测定 总被引:1,自引:1,他引:0
对杂草稻的nrDNA ITS片段的PCR扩增条件进行了优化并测定,建立的PCR最优体系为:20μL反应体系含1μL模板DNA,0.125mmoL/L dNTPs,0.5μmol/L正反向引物,1U Taq酶,2.0μL 10×Taq PCR Bufter;退火温度为57℃。这样的条件下充分保证了ITS PCR产物的质量和纯度要求,直接测序结果为600bp左右,与网上结果十分类似,表明结果准确可靠。这些ITS片段的系统学信息将为杂草稻的起源进化提供有力的分子水平证据。 相似文献
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【目的】纤维素是地球上最丰富的有机聚合物,被视为有潜质的能源生物质。迄今为止,纤维素降解机制依然未被完全解析。通过对不同环境来源的纤维素降解菌群16S rDNA序列数据进行了生物信息学分析,以揭示纤维素降解菌群之间的共性和差异,鉴定核心功能菌,为开发有利用价值的纤维素降解菌和探索纤维素降解机制提供理论依据。【方法】应用SRA Toolkit软件下载NCBI SRA数据库中的16S rDNA基因扩增子测序数据,包括牛瘤胃、牛粪堆肥、森林土壤3个来自于不同纤维素降解环境样本组以及以家犬粪便为对照组的共102个样本的数据。应用FLASH、UCHIME、USEARCH、RDP classifier、mothur、QIIME、Metastats和LEfSe等软件对这些数据进行生物多样性差异比较分析。【结果】Alpha多样性分析显示牛粪堆肥的菌群多样性显著高于其他环境,Beta多样性分析显示不同环境中纤维素降解菌群结构存在很大的差异。所有菌群中共检测到55个门和1 936个属。森林土壤中的变形菌门(Proteobacteria)、牛瘤胃和牛粪堆肥环境中的厚壁菌门(Firmicutes)以及牛粪堆肥中的放线菌门(Actinobacteria)均分别显著高于其他环境,而牛粪堆肥中的拟杆菌门(Bacteroidetes)和森林土壤中的Firmicutes均分别显著低于其他环境,表明不同环境下执行纤维素降解功能的菌群存在着显著差异。相对丰度、LEfSe分析以及之前报道的文献等证据表明,牛瘤胃环境中可作为生物标志物的纤维素降解菌包括毛螺菌科(Lachnospiraceae)、普雷沃氏菌属(Prevotella)、月形单胞菌目(Selenomonadales)和解琥珀酸菌属(Succiniclasticum);牛粪堆肥中包括放线菌纲(Actinobacteria)、芽孢杆菌目(Bacillales)和嗜盐菌属(Halocella);森林土壤中则包括甲型变形菌纲(Alphaproteobacteria)、假单胞菌属(Pseudomonas)、黄杆菌科(Flavobacteriaceae)、伯克氏菌科(Burkholderiaceae)和假噬纤维菌属(Pseudarcicella)。这进一步揭示了不同环境中纤维素降解细菌群落的特异性,同时意味着不同环境间纤维素降解机制也可能不同。【结论】不同环境来源的纤维素降解菌群多样性和结构存在极大的差异;牛瘤胃、牛粪堆肥、森林土壤中具有环境特异性的纤维素降解菌分类单元分别有4,3和5个。 相似文献
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对杂草稻叶绿体psbA-trnH片段的PCR扩增条件进行了优化,建立的最优体系为:20μL反应体积含1μL模板DNA,O.125mM dNTPs.0.5μM 正向引物,1U Taq酶,2.0μL 10 xTaq PCR buffer;退火温度为61℃,在此条件下充分保证了psbA-trnH PCR产物的质量和纯度要求.对该片段进行了直接测序,结果为510bp左右,在NCBI中比较分析表明其测序结果准确可靠.经ClustW分析表明含有丰富的系统学信息. 相似文献