荔枝种质遗传多样性的SRAP分析

为评价荔枝种质的遗传多样性,从88对SRAP引物中筛选出22对多态性高、稳定性好的引物,用于研究46个荔枝品种.每对引物组合产生6～19条谱带,其中多态性条带284条,占总带数的97.93%.46个种质的相似系数在0.469～0.838之间,平均相似系数为0.644.其中,秤砣与红荔的相似性系数最大,亲缘关系最近;小丁香与三月红、三月红与A13两对相似系数最小,亲缘关系最远.UPGMA聚类分析显示,在相似系数为0.644处46份荔枝供试品种被划分为4个类群,并且来源地相同的品种间亲缘关系较密切.22对多态性引物中,引物me7-em2在海垦18中扩增出1条特征谱带,引物me3-em7在水东中也扩增出1条特征谱带,而仅凭这1条特征带就可以将荔枝品种海垦18或水东与其它材料区别开来.这说明SRAP标记可用于荔枝的品种鉴定和群体遗传结构的研究.     

荔枝SRAP—PCR反应体系的优化

SRAP（sequence-related amplified polymorphism）是基于基因的内含子和外显子区域进行检测的新型分子标记技术,具有多态性高、重复性好、易测序、便于克隆目标片段等特点,在荔枝（Litchi chinensis Sonn）中还没有相关的研究报道。为了建立适合荔枝的SRAP反应体系,对反应体系中的DNA模板、Mg^2＋、dNTP、引物、砌DNA聚合酶诸因子的用量进行了探索,确立了适合荔枝的SRAP反应体系为：在20μL反应体系中,模板DNA为40ng,Mg^2＋浓度2．5mmol／L,dNTP0．3mmol／L,引物5mmol／L,TaqDNA聚合酶1．0U。扩增程序为：94℃预变性3min,反应前5个循环在94℃1min、35℃1min、72℃1 min的条件下运行;随后的35个循环退火温度提高到50℃;最后72℃延伸10min。利用该反应体系对荔枝10个不同品系进行SRAP反应,用5％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果显示：不同品系间DNA谱带多态性丰富。证实该体系稳定可靠,可以用于荔枝的分子标记研究。     

分子标记技术在荔枝研究中的应用

详细论述了分子标记技术在荔枝研究中的应用,主要涉及三个方面:荔枝品种鉴定和分类、种质问遗传多样性及亲缘关系分析;荔枝分子标记遗传连锁图谱的构建;与优良性状相关的分子标记的获得.并对其应用前景和存在问题进行了评述.     

桃金娘组织培养初步研究

以桃金娘茎段、叶片、种子为外植体,研究0.1%Hg Cl2和2%Na Cl O单独消毒和组合消毒的消毒效果,探索出适合不同外植体消毒的有效方法和时间;并对最佳的诱导培养基和无菌系建立途径进行筛选。实验结果表明,组合消毒和消毒效率明显优于单一消毒剂消毒,其中单一消毒剂消毒时0.1%Hg Cl2的消毒效果又比2%Na Cl O好;桃金娘茎段、嫩叶、老叶、果实的最佳消毒方式分别为:2%Na Cl O浸泡10 min+0.1%Hg Cl2浸泡8 min、2%Na Cl O浸泡10 min+0.1%Hg Cl2浸泡6 min、0.1%Hg Cl2浸泡10 min+2%Na Cl O浸泡8 min、0.1%Hg Cl2浸泡16 min。嫩叶较老叶和茎段更易诱导出愈伤组织,最佳的诱导培养基为2号培养基,愈伤组织诱导率达77.7%。无菌播种是桃金娘无菌系建立的最佳方式,萌发率高达75.0%。