十种常用农药与球孢白僵菌的生物学相容性

球孢白僵菌孢子粉与10种常用农药相容性的测定结果显示,随着孢子浓度上升,所试农药对孢子的抑制作用均有不同程度的增强。在1/10田间常规使用浓度下,百菌清和代森锰锌均能抑制或杀死孢子(萌发率<1％)。除阿维菌素外,所有杀虫剂均与白僵菌孢子相容,在常规使用浓度的10倍稀释液中孢子萌发率达90％以上。吡虫啉、蚜虱灵、灭多威和氟虫腈与孢子的相容性最好,其中吡虫啉和蚜虱灵对孢子萌发率的影响不明显随药剂浓度的变化而变化,即使在田间常规使用浓度下孢子萌发率也在95％以上,而阿维菌素与白僵菌的相容性极差。因此,应用白僵菌制剂防治害虫,选择生物学相容性好的农药以低剂量与白僵菌制剂混用,既可使菌剂增效,又可大幅度降低化学药剂用量。     

模拟昆虫中肠环境对球孢白僵菌分生孢子的影响

    为了观察孢子在模拟昆虫中肠环境的变化,先配制不同组分的中肠模拟消化酶液(均为0.5%),将稳定表达绿色荧光蛋白菌株的分生孢子悬浮其中,25 ℃或35 ℃恒温孵育4 h后,分别采用流式细胞仪和扫描电子显微镜检测孢子荧光强度和孢子壁形态的变化.孢子荧光强度的改变可以反映酶液对孢子壁消解的程度.结果显示,5种模拟消化液导致荧光强度显著上升,分别为蛋白酶K、链霉蛋白酶E、纤维素酶、胰蛋白酶和α-淀粉酶,但昆布多糖酶、葡萄糖苷酶、蜗牛酶模拟消化液导致荧光强度下降.与单因素模拟消化液相比,复合酶类模拟消化液作用后的荧光强度大幅下降.在pH 5～11范围内,复合酶类模拟消化液处理后的分生孢子荧光强度变化情况差异显著.扫描电子显微镜观察到分生孢子经昆虫模拟消化液处理后孢壁表面结构发生明显变化.这意味着昆虫中肠消化液可能影响球孢白僵菌分生孢子壁结构及其侵染功能.     

三种丝孢类生防真菌孢子类疏水蛋白的含量与组分比较

比较研究了6株球孢白僵菌Beuaveria bassiana(Bb)、5株玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus(Pf)和3株金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae(Ma)孢子类疏水蛋白(HLP)的含量和组分.结果表明HLP含量因菌种和菌株不同而呈现显著差异,其中Bb2861孢子HLP含量最高达23.4μg·mg-1,而Ma297的最低仅5.0μg.mg-1.HLP组分在三种生防真菌间差异明显,球孢白僵菌(12.0、15.0和17.5 kDa)和玫烟色拟青霉(15.0和17.5 kDa)的种内差异不明显.但是,金龟子绿僵菌的HLP组分种内差异较大,Ma2125主要包括17.0和14.5 kDa条带,Ma0201主要包括19.0和13.5 kDa,而Ma297主要条带仅为13.5 kDa.在对Bb2860不同菌体结构的比较研究中,发现其气生分生孢子、气生菌丝和液生菌丝的HLP含量分别为26.3、18.2和16.5μg.mg-1,相互间差异显著,且均含有15.0和17.5 kDa的主要条带.害虫生防真菌孢子HLP含量及组分的初步探明为研究其生物学功能与潜在应用奠定了基础.     

球孢白僵菌分生孢子乳悬剂的配方筛选

从6种常用的食品乳化剂中，筛选适合于球孢白僵菌（Beuaveia bassiana)分生孢子粉使用的乳化剂。除单二甘酯外，其余5种乳化剂的乳化性能与孢子浓度呈正相关。除十二烷基硫酸钠外，各种乳化剂均能以孢子极好地相容。综合乳化性、生物相容性、湿润力和其它理化特性、蔗糖脂肪酸酯S－1可作为白僵菌孢子粉较为理想的乳化剂，使用浓度为0．2％。以0．3％的羧甲基纤维素钠为稳定剂和0．1％的抗坏血酸作为紫外线保护剂，能显著提高孢子悬液在2h内的稳定性，并能较好地保护孢子免受紫外线损伤。     

球孢白僵菌对斜纹夜蛾高毒菌株筛选与制剂的研发

斜纹夜蛾Spodoptera litura是一种危害极大的农业害虫,为了探索1条可持续、无污染的新型防治方法,我们通过标准喷塔法从12株球孢白僵菌Beauveria bassiana中筛选出1株对斜纹夜蛾2龄幼虫高毒力的菌株--球孢白僵菌Bb2860菌株.在喷雾浓度为(2592±275)孢子·mm-2的高浓度下,菌株Bb2860对斜纹夜蛾2龄幼虫在第7d的校正死亡率达82.43%±6.03%.不同制剂的室内生测试验表明,孢子水悬液和2种油剂(分别为不含稳定剂和含有稳定剂)在中浓度319～529孢子·mm-2的喷雾浓度下,7d后对斜纹夜蛾2龄幼虫的累计死亡率分别为54.8%、70.0%和76.7%;菌药协同作用为86.8%.另外,于2009年9月在安徽马鞍山进行自然条件下对花椰菜叶上斜纹夜蛾幼虫的田间小区药效试验.处理9d后,纯菌剂的相对防效为77.64%;低剂量和常规用量5%氟啶脲(抑太保)的相对防效分别为49.02%和89.70%;菌药混用的相对防效为91.13%.本研究显示出利用球孢白僵菌制剂及其与低剂量抑太保混用防治斜纹夜蛾的良好应用前景.     

通过抑制消减杂交技术分离球孢白僵菌热激响应基因

高温等逆境因素会影响生防真菌——球孢白僵菌Beauveria bassiana的田间应用效果。为了深入了解生防真菌热胁迫响应的分子机理,本研究采用抑制消减杂交技术构建了球孢白僵菌热胁迫下的差异表达cDNA文库,筛选出28个热激响应上调基因。通过基因比对分析,大部分基因与已知功能基因如物质运输、基础代谢及胁迫响应类基因等具高度同源性。从中挑选12个基因利用荧光实时定量PCR分析了菌株在40℃下热激15、30、60、120 min后的相对表达水平,结果显示这些基因的表达模式随热激时间和基因不同而异,显示菌体在热激的不同阶段依次启动不同的应激方案来应对热激胁迫。这些热激响应基因为揭示球孢白僵菌的耐热机制和通过遗传改造提高菌株耐热力奠定基础。     

限制性内切酶介导的玫烟色拟青霉原生质转化体系构建

丝孢类害虫生防真菌的生态适应性和环境抗逆性决定着生防菌剂的田间适用性,兼具多个抗逆性状的菌株一般只能通过相关功能基因的遗传操作和定向选育而获得,但这类真菌遗传操作的可行方法目前相当有限.本文利用限制性内切酶介导插入法将含有草丁膦抗性标记的Bar基因的质粒pAN52-1N-Bar转入玫烟色拟青霉Pfr116菌株的原生质体中,转化效率约为6～13个转化子μg-1质粒DNA.通过对Pfr116菌株突变转化子的基因组DNA进行PCR产物检测及基因组DNA单酶切片段的Southern杂交分析,证明Bar基因已整合到随机抽取的转化子基因组中,且都在基因组上单位点插入,转化子对草丁膦的抗性具有遗传稳定性.由此构建的原生质体转化体系具有低拷贝、转化率较高,遗传稳定强的特点,不失为一种丝孢类生防真菌遗传操作的有效方法.