淹涝处理下樱桃总RNA提取方法的建立与优化

以淹涝处理后的樱桃叶片和根系为材料,采用CTAB法、TaKaRa RNA提取试剂盒法和改良试剂盒法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白检测仪比较所提取总RNA样品的质量。结果表明:改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的总RNA完整性高,质量好,无降解;进一步采用改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取樱桃淹涝胁迫0—4 d叶片和根系的总RNA为模板进行RT-PCR验证,发现PCR扩增得到的条带较清晰,与目的片段大小一致。因此,改良TaKaRa RNA提取试剂盒法提取的樱桃叶片与根系总RNA完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是淹涝处理后樱桃总RNA提取的理想方法。     

南国梨果实香气形成相关基因PuFS的克隆与表达分析

为挖掘我国特有的果实香气浓郁的梨资源,弄清其果实芳香成分及含量,并进而研究它们在梨果实中的代谢与调节机制。采用气相色谱质谱联用(GC-MS)技术,分析了我国部分秋子梨品种果实的香气成分,在基础上,以挖掘出的‘南果梨’为试材,采用RACE技术克隆了与其果实特异香气成分生物合成相关的α-法尼烯合成酶基因(PuFS),并采用半定量PCR(RT-PCR)技术分析了该基因在其果实不同发育时期和不同部位的时空表达规律。结果表明:‘荣香’、‘龙香’、‘香水’和‘晚香’的主要香气成分为醛类物质,‘南果’、‘大南果’和‘寒香’梨主要香气成分为酯类物质。在‘南果’梨中还检测出了高含量的α-法尼烯,而在其他品种中α-法尼烯相对含量较低或未检测到,这可能是‘南国’梨具有浓郁香气的主要原因;随着果实的成熟,PuFS基因在‘南果梨’果皮中的表达量呈逐渐下降的趋势,绿熟期表达量最高,商熟期表达量开始降低,完熟期表达量非常弱。而PuFS在3个时期果肉中的表达量均很弱,且差异不明显。总体上,PuFS基因在绿熟期的表达量高于商熟期和完熟期,在果皮中的表达量显著高于果肉。     

两种砂梨果实香气成分分析及其相关基因PpAAT的克隆与表达分析

梨（Pyrus spp）是深受国内外消费者喜爱的水果,果实香气是果实品质的重要指标,也是吸引消费者和增强市场竞争力的主要因素之一。本文以砂梨品种‘二十世纪’及其芽变品种‘金二十世纪’为试材,研究了其果实不同发育时期香气成分的差异,克隆获得了梨果实香气成分合成相关的醇酰基转移酶基因（PpAAT）,分析了该基因在梨果实不同发育时期及不同部位中的时空表达规律,结果表明：‘二十世纪’绿熟期、商熟期和完熟期果实的主要香气成分均为己醛,‘金二十世纪’绿熟期果实的主要香气成分同样是己醛,但商熟期果实中己酸乙酯的含量迅速增加,成为主要香气成分,完熟期时含量进一步增加,高含量的酯类化合物可能是‘金二十世纪’具有浓郁香气的主要原因;随着果实的成熟,PpAAT基因在‘金二十世纪’果皮中的表达量呈逐渐下降的趋势,绿熟期表达量最高,商熟期表达量开始降低,完熟期表达量非常弱;PpAAT在果肉中的表达量呈先升高后降低的趋势,在商熟期果肉中表达量最高,绿熟期果肉中次之,完熟期果肉中的表达量最低。总体上,PpAAT基因在商熟期的表达量高于绿熟期和完熟期,在果皮中的表达量高于果肉。