PCR检测猪输血传播病毒Ⅰ型方法的建立及其初步应用

参照GenBank已公布的猪源输血传播病毒Ⅰ型（Torque Teno Virus genogroupⅠ,TTVⅠ）全基因序列,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增片段为194bp,测序结果与已公布的猪TTVⅠ型序列同源性为92.6%。用所建立的方法检测猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪多杀性巴氏杆菌、猪链...     

PCR检测猪输血传播病毒Ⅱ型方法的建立及其应用

根据GenBank中猪源输血传播病毒Ⅱ型（Swine torque teno virus genogroupⅡ,TTVⅡ）基因序列设计并合成了1对特异性引物,扩增468bp目的片段。将PCR扩增产物测序,结果与GenBank中猪TTVⅡ型基因序列同源性为95%。利用该方法对猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪链球菌、猪多杀性巴氏杆、猪霍乱沙门菌和大肠杆菌等病原核酸进行扩增,均无条带出现,表明该方法具有较高的特异性。该方法的灵敏性试验表明,最低能检测到10.2pg核酸。利用所建立的PCR方法检测来自我国华南地区192份临床样品,阳性率为21.4%（41/192）。     

猪繁殖与呼吸道综合征诊断方法的研究进展

猪繁殖与呼吸道综合征诊断方法的研究进展娄高明①李雪梅②殷震猪繁殖与呼吸道综合征（ＰｏｒｃｉｎｅＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅａｎｄＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙＳｙｎｄｒｏｍｅ，ＰＲＲＳ）是一种新近发现的猪病毒性疾病。它首先在北美洲和欧洲发现，现已遍布世界许多地方...     

猪输血传播病毒的研究进展

1997年,日本学者Nishizawa T等[1]首次报道从非甲-非戊输血后肝炎患者血清中分离出一种新型病毒,即输血传播病毒(transfusion transomitted virus,TTV).由于TTV是从肝炎患者中分离得到,因此怀疑与肝炎有关,受到医学领域的高度关注,一度成为医学研究热点.     

RT-PCR快速检测口蹄疫病毒

根据口蹄疫病毒VP1基因的序列，设计了1对引物，建立了检测口蹄疫病毒的RT－PCR方法。对FMDV各毒株检测，结果均为阳性，而对猪病毒性疾病相关病毒进行检测，结果均为阴性；检测19份已知阳性样品，检出率100％；与动物接种试验比较，符合率100％，证明该方法特异，与经典方法动物接种试验比较，其灵敏度提高100倍左右；对O3I3株的细胞毒进行检测，其敏感度达10个TCID50。初步结果表明所建立的RT－PCR技术可用于口蹄疫的诊断和流行病学调查。     

育肥猪暴发弓形体病

广东省河源市某猪场1999年7月育肥猪因皮肤苍白突然死亡,经流行病学、临床症状、病理剖检、实验室诊断,确诊为弓形体感染.     

仔猪暴发猪繁殖与呼吸道综合征

调查了１９９５年广东省３个猪场暴发的疫病,根据流行病学、临床症状、病理变化、人工感染试验,结合间接免疫荧光试验及电镜观察等实验室诊断,确诊为猪繁殖与呼吸道综合征。     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ,试验方法的最佳工作条件为：抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１：２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体,脑和肺的检出率最高,其次为心,肝,脾,肾等组织。     

真核表达载体构建表达ＰＲＶ闽Ａ株gE基因表位抗原编码区片段的重组质粒

根据伪狂犬病病毒闽Ａ株gE基因表位抗原编码区的序列与身份种真核表达载体pPICZaA、pAcGP67A序列与特性分别设计了两对ＰＣＲ引物。通过ＰＣＲ方法扩增到了两端具有不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这２个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP67A载体，转化大肠杆菌ＴＯＰ１０菌档及ＸＬ１－Ｂlue菌株，获得了含伪狂犬病病毒闽Ａ株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pICZaA-FS与pAcGP67A-FS。序测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。     

猪O型口蹄疫病毒强弱毒株VP1基因的克隆与序列分析

本研究根据口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因的序列，设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物（5P、P6）。从细胞培养液或组织中提取总RNA，通过PT－PCR扩增，从F29株O3I3株和T509株中均获得了1条约740bp的DNA电泳带。将PCR产物双酶切后电泳回收，插入到相应双酶切的pUC18质粒中，获得了重质粒。通过PCR鉴定，证明重组质粒pUCVP1/F29,pUCVP1/0313,pUCVP1/T509均插入了VP1基因。对上述3个重线质粒进行测序后分析，F29强毒株与O313、T509弱毒株相比，其核苷酸序列同源性分别为98．75％和99．06％；因F29株核苷酸发生3个碱基缺失与1个碱基替换，故推导的氨基酸序列同源性分别仅为44．13％和41．32％，而T509和O3I3株相比，其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99．37％和95．31％。通过序列分析发现，本研究的3个毒株与国内大多数毒株（包括1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株，除O／A／58株外）均属同一基因型，核苷酸序列同源性为85％－94％；而与国外毒株相比，属不同的基因型，核苷酸序列同源性仅为81％－82％，其推本研究的3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1基因的氨基酸序列同源性高达87％－95％，本项研究对猪O型FMDV的强弱毒株VP基历进行克隆与序列分析，将进一步丰富我国FMDV毒株VP1基因资料库，为更加科学地防制FMD提供分子水平依据。