毛白杨PtPCP—like基因的克隆及其遗传转化初报

利用滤纸吸附噬菌体 PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtPCP-like基因cDNA全长序列,测序表明克隆得到的该序列全长595 bp,包含一个完整的开放阅读框,编码91个氨基酸;经BLAST分析发现,该基因包含与拟南芥花粉外被蛋白基因相似的序列,命名为PtPCP-like。采用RT PCR技术检测PtPCP-like基因在各个组织部位的表达模式,结果显示在毛白杨的根和雄花芽中表达丰度最高,而在雌花芽部位表达丰度最低。并且构建35S∶∶PtPCP-like植物表达载体,采用农杆菌介导法将PtPCP-like基因导入烟草中,获得了一批阳性转化植株。采用qRT-PCR技术检测PtPCP-like基因在各个转基因烟草中的表达模式,结果显示在转基因烟草中各个株系均比野生型表达量高,且不同株系间相对表达量差异显著。      

毛白杨PtSEP3-1基因启动子的克隆分析及其表达载体构建

SEP（SEPALLATA）类基因属于花器官发育ABCDE模型中的E类基因,拟南芥中的研究表明该类基因可能具有控制花器官形态发育以及激活其它类型基因的功能,是一类花发育过程中的关键基因。因此,研究杨树SEP类基因启动子表达特性对于杨树的开花调控研究具有重要意义。本文根据毛白杨SEP3基因和毛果杨基因组序列设计引物,通过PCR获得了PtSEP3-1,基因上游2000bp的序列。序列分析结果表明该序列具有启动子的基本元件TATA—box和CAAT-box,还包含大量光响应元件ACE、BoxI和Box4等,此外还有脱落酸响应元件ABRE,赤霉素响应元件GARE—motif以及胁迫响应元件HSE、TC—richrepeats等。进一步构建了一个以PtSEP3-1启动子驱动GUS基因的植物表达载体pPtSEP3-1,protest,为该启动子的功能鉴定奠定了基础。     

毛白杨labA-1ikel基因的克隆与表达特性及其表达载体的构建

利用滤纸吸附噬菌体一PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtlabA-1ikel基因cDNA全长序列。在Conserved Domains Database（CDD）中对该基因氨基酸保守结构域进行分析,发现其包含一个LabA—like superfamily结构域,故将其命名为PtlabA—likel。经BL...     

毛白杨labA-1ikel基因的克隆与表达特性及其表达载体的构建

利用滤纸吸附噬菌体一PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtlabA-1ikel基因cDNA全长序列。在Conserved Domains Database（CDD）中对该基因氨基酸保守结构域进行分析,发现其包含一个LabA—like superfamily结构域,故将其命名为PtlabA—likel。经BLAST分析,在毛果杨基因组数据库中检索到含有该保守结构域的其他9个家族成员。运用BioEdit和MEGA3．1软件,绘制了该基因家族表达蛋白的系统进化树。通过RT—PCR分析,揭示了该基因及其他家族成员在毛白杨中的组织差异表达模式：PtlabA—likel、PtlabA—like6呈现相似的组织表达模式,在茎、幼叶、成熟叶和雌雄花芽组织中均表达,但PtlabA—likel表达丰度较高;PtlabA—like8只在根部表达,且表达丰度较低;其他成员在根、茎、成熟叶、幼叶和雌雄花芽组织中均有表达,但是不同成员的表达丰度存在一定的差异。为进一步研究该基因的功能,构建了该基因的正义表达载体。     

利用胡杨F_1代愈伤组织定位耐盐基因

耐盐性是植物适应高渗透势盐碱环境的重要特征,植物耐盐机制受基因调控。随着土壤盐渍化的日益严重,耐盐基因的探寻对植物耐盐品种的选育以及农林业发展具有重要指导作用。本研究以胡杨F_1代90个不同基因型个体的愈伤组织为实验材料,分别采用含有0 mmol/L和80 mmol/L NaCl溶液浓度的愈伤增殖培养基进行连续培养。在培养第0天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天、第49天、第63天分别对各基因型个体构建愈伤生长的动态表型。联合简化基因组测序获得的8 305个SNP标记,利用功能作图方法定位耐盐基因。结果发现:(1)细胞周期蛋白基因CDC123和编码葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因G6PDH2在盐胁迫下激活表达,对促进愈伤组织在盐环境下的生长与适应起重要作用;(2) FD-GOGAT和ARI7是重要的生长调控基因,但其对生长的调控不受盐条件影响;(3)细胞色素CYP450家族的CYP71D11基因、几丁质酶基因Chitinase 2-like是盐敏感基因,盐环境下可使其生长缓慢。该结果可在细胞层面为耐盐机制的研究提供新的思路,并为耐盐品种的改良和选育提供理论指导。