用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化

【目的】提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率。【方法】在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括：用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55℃,以40 mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50%乙腈（ACN）水溶液3步萃取;并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法。【结果】使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55℃温浴可使酶切时间由20 h减少为2 h,以40 mmol/L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤。优化后,质谱鉴定率提高30.0%（绝对值）,且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地呈现出来。【结论】优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测。     

豫西脂尾羊的血清酯酶与体尺性状的关联分析

运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(PAGE)对豫西脂尾羊血清酯酶(Es)的多态性进行检测和分析。结果表明,在豫西脂尾羊上Es基因座有2个等位基因即Es~+和Es~-,而且Es~+和Es~-的基因频率别为0.55和0.45,有3种基因型Es~(++)、Es~(+-)、Es(~--),其频率分别为0.425、0.250和0.325。不同基因型西清酯酶对体尺的影响结果表明,在荐高方面,Es~(++)基因型显著高于Es+-基因型(P0.05),而两者均与Es~(--)基因型没有显著差异(P0.05)。在胸围方面,Es~(++)基因型极显著高于Es~(--)基因型(P0.01),而两者均与Es~(+-)基因型的胸围没有显著差异(P0.05)。Es对其他指标都无显著影响(P0.05)。     

利用MALDI-TOF质谱比较水牛卵泡液多肽变化的研究

为检测卵泡内小肽的表达,采用基质辅助激光解离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)建立了成熟卵泡液的多肽表达模型,比较小卵泡(直径<4 mm)、中等卵泡(直径4~8 mm)和成熟卵泡(直径>8 mm)的多肽表达变化。结果表明,3种形态的卵泡液存在12个显著差异多肽,其中在成熟卵泡内上调6个,下调有5个;在中等卵泡内上调4个,下调5个。其中分子质量约为1746 u的多肽在成熟卵泡中特异性表达,可作为卵泡成熟的潜在生物标志物之一。     

水牛卵泡液液相色谱分离及差异蛋白质分析

本研究采用液相色谱－质谱分离鉴定技术,比较不同直径卵泡液(直径＜2 mm、直径2~4 mm、直径＞4 mm)的蛋白质组分差异,收集显著差异的馏分,还原烷基化处理后酶解成肽段,再经反相色谱二次分离后质谱鉴定。结果表明,在优势卵泡中(直径＞4 mm)存在显著高表达的蛋白质峰,质谱鉴定结果为转铁蛋白(transferrin,TRF)。转铁蛋白的功能和表达的变化提示,该蛋白质的高表达可作为潜在排卵的标志物之一。同时,本研究采用的LC-MS技术将为卵泡液大规模蛋白质组分离和表达谱构建提供参考。     

河南地方绵羊品种BMPR-IA基因的多态性研究

采用PCR-SSCP方法检测BMPR-IA基因在高繁殖力绵羊品种(大尾寒羊和小尾寒羊)以及低繁殖力绵羊品种(豫西脂尾羊)中的多态性,以期探索该基因对于河南地方绵羊品种繁殖力的影响.结果表明:在3个绵羊品种中BMPI-lA基因检测出2个基因型即AA和AB,在小尾寒羊和大尾寒羊中AA基因型频率分别为0.525和0.778,...     

用于质谱鉴定蛋白质胶内酶解方法的优化

【目的】提高蛋白质胶内酶解效率,减少萃取过程中肽段的损失,增加质谱鉴定的成功率。【方法】在常规胶内酶解方法的基础上,优化脱色、酶解、萃取等步骤,包括：用铁氰化钾和硫代硫酸钠对银染胶块脱色,酶解温度提高至55％,以40mmol／L碳酸氢铵作为酶切缓冲液,使用50％乙腈（ACN）水溶液3步萃取;并使用一步法胶内酶解探索快速胶内酶解方法。【结果】使用铁氰化钾和硫代硫酸钠可在短时间内将银染胶块完全脱色,55℃温浴可使酶切时问由20h减少为2h,以40mmol／I碳酸氢铵作为酶切缓冲液,可省去ZipTip脱盐步骤。优化后,质谱鉴定率提高30．0％（绝对值）,且能明显高酶切效率,使目标肽段更高丰度地呈现出来。【结论】优化后的胶内酶解法可显著提高蛋白质胶内酶解的质谱鉴定成功率和肽段覆盖率,其中一步法胶内酶解法有效减少了胶内酶解时间和步骤,可用于高丰度蛋白质的快速质谱检测。     

天然气管道合理管存方法的应用

介绍了天然气管道管存合理控制的重要性、重要影响因素和确定方法,对比分析了通过模拟软件和管存计算系统两种方法计算管存的优缺点.结合国外长输管道合理管存方法的应用经验,以西气东输管道为例,进行了合理管存计算和分析.     

基于点云配准的盆栽金桔果实识别与计数方法

为解决整株盆栽金桔果实识别及总体计数问题，提出了基于三维点云配准的金桔果实识别方法。首先，使用RGB-D相机采集植物多角度点云数据并进行背景去除和去噪处理。然后采用随机采样一致性(Random sample consensus, RANSAC)算法进行圆柱拟合获得旋转中心轴参数，将点云绕中心轴旋转固定角度完成初配准，之后采用点到面的迭代最近点(Iterative closest point, ICP)算法完成精配准得到完整点云。最后，对点云进行欧氏聚类分割，采用随机采样一致性算法对聚类后点云进行球形分割，获得每个果实的三维空间位置并计数。本研究对9株盆栽金桔(共149个果实)进行识别，总计识别查全率为85.91%,查准率为79.01%,F1值为82.32%,果实数量预测值和真实值的决定系数为0.97,平均绝对百分比误差为16.02%。实验结果表明，本文方法不依赖颜色信息，能够有效识别整株植物中未成熟的青色果实，可为果实识别与产量估计等研究提供参考。