亚洲玉米螟幼虫体内储存蛋白cDNA片段克隆与序列分析

为研究亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guen e)幼虫体内储存蛋白(SP)表达调控的分子机制,根据不同昆虫储存蛋白基因序列的保守区域,设计合成简并引物,采用RT-PCR技术从亚洲玉米螟5龄幼虫中扩增出一段cDNA片段,大小为892bp,编码297个氨基酸,预测分子量为35.7kD,理论等电点pI值为8.73。该基因序列中含有保守的幼虫储存蛋白(LSP)两个特征基序YFTEDIDLNTYYYYFHVDYP和TALRDPVFC。Blast P分析结果表明:该片段推导的氨基酸序列与斜纹夜蛾Spodoptera litura适量甲硫氨酸SP-1的一致性最高,为77%;与小菜蛾Plutella xylostella富含甲硫氨酸SP-1和SP-2、印度谷螟Plodia interpunctellaSP、美国白蛾Hyphantria cuneaSP-2和粉茎螟Sesamia nonagrioides适量甲硫氨酸SP氨基酸序列的一致性分别为74%、74%、72%、71%和65%。构建系统发育树分析了9种鳞翅目昆虫储存蛋白进化关系,结果显示:亚洲玉米螟cDNA片段氨基酸序列与小菜蛾富含甲硫氨酸SP-1的亲缘关系最近,与粉茎螟适量甲硫氨酸SP亲缘关系最远。     

亚洲玉米螟幼虫体内酚氧化酶原cDNA片段的克隆

利用昆虫酚氧化酶原(PPO)基因序列设计简并引物，采用RT-PCR方法从亚洲玉米螟幼虫体内扩增了一段522个核苷酸的eDNA片段，编码174个氨基酸。经Blastp分析表明，该段氨基酸序列同鳞翅目和双翅目中PPO的相同区域具有较高的相似性(39％一63％)。其中与烟草天蛾PPO的相似性最高(63％)；与家蚕、大蜡螟、惜古比天蚕蛾PPO也有较高的相似性。在该片段中含有1个该类酶原中保守的2个铜离子结合位点之一(含4个组氨酸残基)。据此推断克隆的片段为PPO基因片段。     

亚洲玉米螟幼虫血淋巴中酚氧化酶原的多克隆抗体制备及免疫学特性分析

为探讨酚氧化酶原(PPO)的合成转运机制,采用硫酸铵沉淀、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Phenyl Sepharose CL4B疏水层析等方法从亚洲玉米螟幼虫血淋巴中纯化得到PPO,纯化倍数为369.85,回收率为35.34%.采用免疫印迹和酶联免疫吸附进行纯化PPO的免疫原性及其多克隆抗体的效价测定,并以透射电镜检测PPO在亚洲玉米螟幼虫体壁和中肠中的分布.结果表明,纯化PPO蛋白全酶相对分子量约为158 kD;免疫2只鼠后所得pAb间接ELISA效价均高达10-5,其中第2号小鼠pAb效价最高为1:4.08×104;PPO多克隆抗体具有相对较高的特异性;在亚洲玉米螟5龄幼虫中肠和体壁组织中金颗粒呈团状和点状分布.     

抗冻蛋白研究进展

抗冻蛋白是一类广泛存在的具有热滞活性、能改变冰晶生长特性和抑制冰晶重结晶的蛋白质.本文综述了各种抗冻蛋白的特性、结构和分子作用机理,并对抗冻蛋白基因及抗冻蛋白应用前景作了论述.     

亚致死剂量双氧威和虫酰肼对亚洲玉米螟幼虫生长发育的影响

测定亚致死剂量昆虫生长调节剂双氧威和虫酰肼对亚洲玉米螟5龄幼虫发育历期、化蛹率、体重、脂质含量及血清中糖和蛋白含量的影响。结果表明:双氧威LC₃₀、LC₂₀、LC₁₀依次为22.23、14.75、4.37μg/mL,虫酰肼LC₃₀、LC₂₀、LC₁₀依次为48.20、37.11、21.73μg/mL。LC₃₀亚致死剂量双氧威处理可使5龄幼虫的发育历期延长至8.33±0.69天,而虫酰肼处理则使其缩短至5.49±0.66天。亚致死剂量双氧威和虫酰肼处理均使幼虫体重及化蛹率明显降低(P<0.01),其体内脂质含量和血清中糖和蛋白含量也低于对照组(P<0.01),同时5龄幼虫血清中储存蛋白的合成受到抑制。     

腰带长体茧蜂寄生后亚洲玉米螟体内抗氧化酶活性及组织特异性

测定被腰带长体茧蜂寄生的亚洲玉米螟5龄幼虫体内不同组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活性,以研究寄主昆虫免疫过程中产生的活性氧自由基(ROS)与抗氧化酶的关系.结果表明:被寄生后,寄主幼虫体内应激产生大量ROS,从而诱导SOD、CAT、POD活性明显上升(P＜0.01).不同组织中SOD、CAT和POD的分布存在差异,说明亚洲玉米螟被腰带长体茧蜂寄生所诱导产生的抗氧化酶可协同作用,从而清除体内产生的过量ROS.这种组织特异性有利于保存寄主,使寄生蜂成功寄生.     

高温对褐飞虱体内保幼激素酯酶活性的影响

七八月份高温季节,水稻害虫褐飞虱[Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａｌｕｇｅｎｓ(Ｓｔｌ),ＢＰＨ]迁飞至长江中下游及江淮平原稻区生长繁殖。褐飞虱对温度的反应比较敏感,在水稻生长季节其发生主要受高温控制[1]。异常高温可降低昆虫咽侧体的活性,引起体内保幼激素滴度(ＪＨｔｉｔｅｒ)的变化,从而影响卵黄的形成[2]。为探索高温条件下褐飞虱体内ＪＨｔｉｔｅｒ的变化及其对生殖的影响,笔者对高温条件下代谢保幼激素的保幼激素酯酶(ＪＨＥ)活性变化进行了研究,现将有关结果报道如下。1　材料和方法11　材料　　褐飞虱虫源采自广西南宁,温室饲养,自然…     

亚洲玉米螟幼虫体内抗菌肽的诱导

外源物侵染可引起亚洲玉米螟幼虫产生免疫应激反应,并诱导产生抗菌肽.为深入研究抗菌肽作用机制,作者给亚洲玉米螟5龄幼虫注射大肠杆菌,诱导其产生抗菌肽,并分析该抗菌肽的部分性质.结果表明:亚洲玉米螟幼虫注射3.0×10~6个/mL大肠杆菌后可诱导其体内产生一种相对分子量为12.1 kD的抗菌肽,在12～36h内该抗菌肽的诱导表达量与时间成正比.此抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用,100℃高温处理5 min后具有明显的抑菌活性,pH为8.0时抑菌活性最强,抑菌圈直径达6.9±0.3 mm,且具有一定的温度稳定性和酸碱稳定性.     

昆虫生长阻滞肽研究进展

在长期进化中，细胞因子在昆虫的环境适应、生长发育和免疫防御中发挥重要作用。昆虫生长阻滞肽(Growth-blocking peptide, GBP)是一种最初在黏虫(Pseudaletia separata)中发现的细胞因子，能够延缓幼虫化蛹。近年来研究结果陆续证实GBP是一种双重生长调节因子，通过影响胰岛素信号通路以调节昆虫生长发育，调控昆虫的免疫和应激反应，平衡体液免疫和细胞免疫。本文简要综述GBP参与调控昆虫免疫、生长与发育的功能，并对未来相关的研究方向和应用进行了展望，有助于了解GBP的生理功能及昆虫维持机体内稳态的分子机制。