牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。     

可视化引导小鼠子宫灌注方法的建立

为了减少因盲插而造成子宫的机械损伤和穿孔,提高小鼠子宫灌注的准确率与成功率,连续5 d对雌性小鼠阴道上皮细胞进行H.E染色,确定发情周期,通过具有照明与摄像的仪器辅助引导子宫插管,评估各时期子宫颈口紧张度及子宫插管难度,然后在第5天筛选出子宫插管评价为困难的小鼠,通过可视化引导对其子宫灌注染液,最后处死小鼠,解剖小鼠腹腔,检查子宫染色情况。结果显示,发情期小鼠子宫颈口紧张比例低于其他情期小鼠（P<0.05）,发情间期小鼠子宫插管困难比例高于其他情期小鼠（P<0.05）;对第5天进行子宫灌注染液的小鼠解剖,显示子宫染色全部成功。可视化引导子宫灌注提供了可靠易行的子宫灌注方法,可减少因盲插或开腹方法所引入的人为因素及误差。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。