来宾地区雌性克氏原螯虾卵巢发育分析

为探究克氏原螯虾在来宾地区生长繁殖周期,于2019年5—8月,采用石蜡包埋法,对当年4月下旬放入的20 g左右雌虾的卵巢进行切片研究。结果表明,在5月中下旬雌虾卵巢已经开始发育,6月卵巢发育缓慢,7月其发育呈现不同步性,7—8月卵巢发育迅速,8月下旬已经出现大量成熟卵母细胞,9月中旬开始大规模抱卵,来宾地区4月放养的种虾,在9月便可达到性成熟并进行繁殖。     

小鼠抗病毒基因viperin的原核表达及其抗原性探索

Viperin是一种由Ⅰ型和Ⅱ型干扰素诱导的宿主蛋白,在进化上高度保守。本研究以小鼠脑组织为原材料,通过RT-PCR扩增得到包括完整open reading frame（ORF）的1 155 bp的viperin基因序列,成功亚克隆并构建了原核表达载体pET-32a-vip,将其转化到大肠杆菌Rosetta中进行原核表达。结果表明：原核表达的重组蛋白viperin主要以包涵体的形式表达,用镍离子亲和层析法获得纯度较高的viperin蛋白,为探讨原核表达的viperin抗原特性,将纯化的viperin蛋白免疫4周龄昆明小鼠,制备得到抗viperin多克隆抗体。经Western blot和IFA检测,该抗体能与真核细胞自然表达的viperin反应,特异性良好且效价高,表明原核表达的viperin具有良好的抗原性。获得的多克隆抗体为进一步研究viperin的抗病毒生物学功能奠定了良好的基础。     

水牛卵母细胞玻璃化冷冻后孤雌激活方法的优化

[目的]了解玻璃化冷冻一解冻及不同孤雌激活条件对水牛卵母细胞发育潜能的影响,为构建完善的水牛卵母细胞孤雌激活培养体系奠定基础.[方法]利用玻璃化冷冻法对水牛体外成熟卵母细胞进行冷冻保存1～2d,解冻复苏后进行孤雌激活,以新鲜的体外成熟卵母细胞为对照,探讨离子霉素浓度、6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)浓度和处理时间对玻璃化冷冻复苏后水牛卵母细胞孤雌激活效果的影响.[结果]与新鲜的体外成熟卵母细胞相比,玻璃化冷冻—解冻复苏后水牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率均极显著降低(P＜0.01).水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,以3.5 μmol/L离子霉素激活5 min联合2mmol/L 6-DMAP培养2h的孤雌激活效果最佳,其卵裂率、4-细胞率、8-细胞率和囊胚发育率分别为60.6％、45.1％、33.7％和14.8％.[结论]水牛体外成熟卵母细胞经玻璃化冷冻—解冻复苏后,其激活阈值发生改变,因此不宜采用与新鲜体外成熟卵母细胞一致的激活程序进行孤雌激活.     

广西不同地区克氏原螯虾群体遗传多样性微卫星分析

[目的]了解当前广西克氏原螯虾(Procambarus clarkii)群体的遗传背景,为其人工养殖及种质资源保护提供参考依据.[方法]选取广西5个地区(南宁、大塘、融水、柳州和来宾)的克氏原螯虾群体作为研究对象,利用8对微卫星引物对各克氏原螯虾群体基因组DNA进行PCR检测,然后通过PopGene32和NTSYSpc 2.1等在线软件分析广西克氏原螯虾群体的遗传多样性.[结果]南宁(NN)、大塘(DT)、融水(RS)、柳州(LZ)和来宾(LB)5个克氏原螯虾群体的平均有效等位基因数(Ne)为2.5142~3.0574,平均期望杂合度(He)为0.5708~0.6489,平均多态信息含量(PIC)为0.4899~0.5843,存在中度至高度的遗传多样性,其中南宁群体和大塘群体的遗传多样性略低于融水群体、柳州群体和来宾群体.5个克氏原螯虾群体的平衡偏离指数(D)均为负值,且发生一定程度的Hardy-Weinberg平衡偏离,杂合子缺失现象普遍存在.5个克氏原螯虾群体间的基因流(Nm)为2.3898~6.0284,遗传分化指数(Fst)为0.0398~0.0947,表明各群体间存在广泛的基因交流,仅存在低度至中度的遗传分化;各克氏原螯虾群体间的遗传相似系数和遗传距离分别为0.6861~0.8583和0.1528~0.3768,其中,遗传距离趋势与Fst趋势一致,而遗传相似系数与Nm趋势一致,均表明柳州群体与来宾群体具有高度的相似性,遗传距离较近.UPGMA聚类分析结果也显示,南宁群体和大塘群体聚类为一支,而柳州群体先与来宾群体聚类再与融水群体聚类成另一支.[结论]广西不同地区克氏原螯虾群体具有一定的遗传多样性,但其杂合子缺失现象普遍存在,应通过适当引种及加强不同地区群体间的遗传交流,保护好克氏原螯虾的优良种质资源.     

大鳞副泥鳅规模化繁育技术

正目前,泥鳅养殖方兴未艾,特别是稻渔综合种养在我国大力推广后,泥鳅苗种需求量逐渐增高。本文根据项目研究和生产实践,归纳总计了大鳞副泥鳅规模化繁育技术,达到量产泥鳅苗种的要求,为泥鳅规模化养殖提供良好铺垫。一、亲鳅选择和强化培育1.亲本培育池塘土塘,有独立进排水口,排灌方便,面积500～1200米2,水深1～1.2米,淤泥厚度小于25厘米。进水口设80～100目过滤袋网,排水口设     

黄喉拟水龟白眼病病原菌分离鉴定及药敏试验

【目的】明确黄喉拟水龟白眼病的病原菌及其药敏特性,为该病的防控提供参考依据。【方法】对患白眼病的黄喉拟水龟进行无菌解剖、划线培养、分离筛选,对分离获得的菌株进行培养特征、生理生化特性鉴定、16S rDNA序列分析及同源性比对分析,通过动物致病性试验鉴定致病性,并采用药敏试验检验其耐药性。【结果】从患白眼病黄喉拟水龟稚龟肝脏、肺脏及脾脏中分离获得的优势菌株对小白鼠和黄喉拟水龟均有强的致病性,为兼性厌氧、产酸、产气、发酵型、无运动能力的革兰氏阴性杆菌,其16S rDNA序列(GenBank登录号KU855372)与肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)的同源性达99.1%。分离菌株对恩诺沙星、头孢噻吩、头孢噻肟、氧氟沙星等高度敏感,但对链霉素、新霉素、青霉素、卡那霉素、四环素、克林霉素、强力霉素、阿莫西林、复方新诺明等已产生耐药性。【结论】肺炎克雷伯菌是引起黄喉拟水龟白眼病的主要病原菌,生产中可选用恩诺沙星、氧氟沙星等沙星类或头孢噻吩、头孢噻肟等头孢类药物进行防治。