热休克蛋白40在病毒生命周期中作用的研究进展

热休克蛋白(Hsps)又称热激蛋白,其种类多、分布广,具有高度的保守性。Hsp40作为Hsp70的辅助分子伴侣,拥有自主的分子伴侣活性,参与调节细胞的多种生理生化过程。文章以近年来国内外最新研究资料为基础,对Hsp40在几种典型病毒生命周期中的作用进行了总结,以期为有关Hsp40在病毒免疫中作为检测标志物、治疗靶点、免疫佐剂或发挥其他功能的研究提供理论参考。     

基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起。该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失。近年来疫苗免疫接种是防控PCVAD的有效手段,由于衣壳蛋白(capside,Cap)是PCV-2的主要免疫保护性抗原,因此常被用作研制PCV-2基因工程疫苗的理想靶抗原。论文就PCV-2Cap蛋白基因工程疫苗的研究进展进行综述,以期为今后PCV-2新型疫苗的研究提供参考。     

微量元素硒在动物体内的抗病毒作用研究进展

人体正常生命活动离不开微量元素硒,硒具有良好的抗氧化性、抗肿瘤性和抗重金属性,不仅能参与调节机体免疫反应和激素水平,而且可以抑制多种病毒的复制。人体对硒摄取过多或不足都会导致相应疾病。由于自然界硒分布不均,我国人口普遍缺硒,适当且有效地补硒对打造全民健康极其重要。本文以近年来国内外最新研究资料为基础,对硒的几种典型抗病毒作用进行了系统的总结,以期为硒抗病毒作用相关研究提供理论参考,为富硒食品、含硒药物、富硒保健品等硒产品的研发与推广提供理论支撑。     

PCV2 Cap蛋白的胞内互作蛋白研究进展

猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus virus type 2,PCV2)可引起断奶仔猪多系统衰竭综合征等疾病的综合感染。PCV2负义链上第2个开放阅读框编码的Cap蛋白是唯一的结构蛋白。目前,对PCV2致病机理的研究也都集中于Cap蛋白,尤其是Cap蛋白与其胞内互作蛋白之间的相互作用等方面。文章结合国内外最新研究进展,对PCV2Cap蛋白的胞内互作蛋白进行了综述,以期为揭示Cap蛋白在PCV2致病中的作用提供参考。     

猪热休克蛋白40(Hsp40)的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

克隆猪热休克蛋白40 (heat shock protein 40,Hsp40)基因并构建其原核表达载体,以纯化的猪Hsp40蛋白为抗原免疫兔制备抗猪Hsp40多克隆抗体。参照GenBank收录的猪Hsp40全基因序列,设计1对特异性扩增其CDS区全序列的引物,利用RT-PCR方法扩增猪Hsp40基因;扩增产物经双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1-His,测序无误后转化Arctic Express (DE3) RP感受态高效表达宿主菌,优化其表达条件(时间、IPTG浓度、温度)后,将可溶性的猪Hsp40重组蛋白用His-Band Ni^+层析柱进行纯化,用纯化的His-Hsp40重组蛋白免疫兔以制备多克隆抗体。采用抗原亲和纯化法对制备的多抗进行纯化,并采用间接ELISA法检测抗体效价。利用Western blot检测重组蛋白的免疫原性和反应原性,以及抗体的特异性。结果显示,克隆得到的猪Hsp40基因片段长度为1 485 bp,表达出的可溶性His-Hsp40重组蛋白相对分子质量约为57 800,制备出的猪Hsp40蛋白多克隆抗体效价为1∶512 000,且该多抗能够特异性识别His-Hsp40重组蛋白和猪肺泡巨噬细胞中的Hsp40蛋白。结果表明,成功克隆了猪Hsp40基因,表达并纯化了猪Hsp40蛋白,制备的兔抗猪Hsp40蛋白多克隆抗体能够有效地应用于猪Hsp40蛋白抗原的检测。     

猪热休克蛋白40(Hsp40)基因的克隆及过表达和RNA干扰载体的构建

热休克蛋白(Hsp)是在各种生物体内广泛分布的一类具有高度保守性、短时性、多样性等特点的热应激蛋白质,参与细胞的多种生理生化活动。已有研究表明,Hsp40在多种病毒感染细胞的过程中发挥重要作用,但其对猪圆环病毒2型(PCV2)复制的影响及机制尚不清楚。为了探究Hsp40在PCV2感染中的生物学功能,在克隆猪Hsp40基因CDS区全基因序列的基础上,采用双酶切位点法分别构建猪Hsp40基因的过表达载体和RNA干扰载体。该研究为猪Hsp40转基因细胞株的构建搭建好平台,同时也为挖掘猪Hsp40对PCV2感染的响应机制提供极大的便利。     

K88 K89添加剂对雏鸡抗寒和促生长的影响

选用一日龄Hesix公雏鸡175只,在低于适宜育雏温度饲养,用来研究全价日粮中添加K88,K89两种添加剂对雏鸡抗寒与促生长作用的影响,结果表明,各组间雏鸡起始均重差异不显著,14日龄后试验组平均增重好于对照组(P<0.05),到26日龄,添加K89,试验组增重明显,高出对照组44.94g(P<0.01)。各组间饲料比无明显差异(P>0.05)。试验组抗病能力明显增强,在极端降温试验中,当环境温度降至13.9℃,2.5h后试验组雏鸡肛温变化在38.56±2.9℃,对照组雏鸡肛温在35.9±1.7℃,对照组个别雏鸡体温在31.5℃以下,对照组体温平均比试验组低1、2℃。试验组T_3的血浆浓度高出未降温对照组5nmol/L,高于降温对照组2nmol/L。结果提示:K88,K89两种添加剂具有抗寒和促生长作用。     

广西北部湾地区猪圆环病毒2型检测及其ORF2遗传变异分析

为了解猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)在广西北部湾地区的流行情况和其ORF2基因的遗传变异规律,本研究采用PCR方法对2016年采自广西北部湾地区规模猪场和农村散养户的306份疑似PCV2感染猪的血液和组织样品进行了PCV2的病原学检测,同时对分离的4株PCV2 ORF2基因进行PCR扩增、克隆和测序,并与Gen Bank中登录的34株国内外PCV2参考株ORF2序列进行比对和遗传进化分析。结果表明:PCV2检测阳性样品为129份,阳性率为42.16%。随机选取的4份阳性病料PCV2 ORF2基因测序结果显示,4个毒株遗传关系上均属于Group 1(PCV2b),其中BBW-1和BBW-2分离株属于1A分支且分别与Fd3株(AY321984)和NL_PMWS_3株(AY484415)同源性较高,BBW-3和BBW-4分离株属于1B分支且BBW-4分离株与Hu Zhou0301株(AY536756)和NL_Control_1株(AY484407)同源性较高,其ORF2基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%~99.5%和93.9%~95.4%,说明该地区PCV2的优势基因型是PCV2b。研究结果不仅有利于掌握广西北部湾地区PCV2流行毒株同源性情况,而且将为该地区(porcine circovirus associated disease,PCVAD)的防治和新型疫苗的研制提供依据。