白藜芦醇合成酶(RS)基因转化胡萝卜及高白藜芦醇转基因胡萝卜株系的筛选

白藜芦醇是具有抗病及多种保健功能的芪类次生代谢物,胡萝卜(Daucus carota var.sativa)则是富含β胡萝卜素等多种营养成分的重要蔬菜。研究着眼于创建具有白藜芦醇保健功能的胡萝卜新种质资源,在对葡萄(Vitis vinifera L.)白藜芦醇合成酶(resveratrol synthase,RS)基因在胡萝卜中高效表达的密码子优化基础上构建无潮霉素磷酸转移酶(HPT)抗性基因的转化载体pCB-RS-hyg-,应用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将pCB和pCB-RS-hyg-共转化到胡萝卜并获得再生植株。经过T0、T1和T2代的逐代筛选,获得2个白藜芦醇含量较高(11.34和15.23mg/g)的转基因胡萝卜株系。     

间接原位RT-PCR法检测辣椒叶组织中辣椒轻斑驳病毒的分布

为了了解辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）在辣椒组织中的分布特点,探索利用间接原位RT-PCR技术对病毒在辣椒组织中进行定位。利用改进的CTAB法从辣椒叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出PMMoV的特异片段,并经克隆测序,证明其为PMMoV的特异片段。利用PCR技术,制备出了地高辛标记的特异cDNA探针。对原位RT-PCR反应体系进行优化,经过切片制备（切片厚度7 μm、应用Superfrost plus正电荷防脱载玻片）、预处理（1 mg ? L-1蛋白酶K消化5 min）、RT-PCR（37 ℃反转录2.5 h、PCR退火温度为58 ℃）、杂交检测,建立了应用间接原位RT-PCR技术检测PMMoV在辣椒组织中分布的方法。原位RT-PCR结果显示,叶片组织中PMMoV阳性信号主要分布于栅栏组织,其次是海绵组织,表皮组织中也有少量阳性信号。此外,叶柄中可见少量阳性信号,主要位于表皮组织。     

利用RT-PCR技术检测辣椒轻斑驳病毒的研究

在田间病害调查过程中发现的一批感染病毒病的辣椒样本,经摩擦接种技术将病毒接种于烟草叶片,以期进行病毒鉴定.结果表明:经摩擦接种后烟草叶片显示斑驳、花叶症状;采用CTAB法提取辣椒及烟草叶片总RNA,利用RT-PCR技术,以辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMo V)特异引物,扩增出了预期大小片段,经测序证明其为PMMoV特异片段.     

植物病毒种传机制研究进展

从种传病毒主要类型及特点、病毒在种子组织中定位技术、种传病毒研究策略及进展和种子处理措施等方面对病毒种传的研究进展进行了综述。基于国内外研究进展,建议将最新的分子生物学、植物病理学技术引入到种传病毒研究领域,提高病毒在种子中定位的精确性;同时,有必要从多个角度分析病毒种传机制。     

菌根真菌定殖检测技术研究进展

菌根真菌可与植物根系形成菌根共生体,从而影响植物生长发育。绝大多数菌根真菌促进植物生长,并能够促进植物抵御环境胁迫,因而了解菌根真菌在植物根部的定殖具有重要意义。本文对锥虫蓝染色法、免疫组化及免疫荧光技术、原位杂交这几种主要的菌根真菌定殖检测技术进行了介绍,并对各方法的特点进行了评述。     

大鼠粪便中奇异变形杆菌的分离

以大鼠粪便样品为试材,经多次分离培养,获得了8个特异菌落,其直径为1～2 mm,革兰氏染色阴性。以分离菌株的基因组DNA为模板,利用细菌16S rRNA通用引物对菌株进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序。结果表明,测序结果与GenBank中已报道的奇异变形杆菌(Proteus mirabikis)菌株的序列相似性为100%。结合形态学特征,初步鉴定菌株32N、36N、20A为奇异变形杆菌。奇异变形杆菌为条件致病菌,应注意避免动物粪便对水及食物的污染。