杨树ISSR反应体系的建立及正交设计优化

采用正交设计的方法,对杨树ISSR-PCR反应中5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物)在4个水平上进行优化试验。建立了适合杨树的既稳定又能扩出最多数量谱带的ISSR-PCR最佳反应体系,即25μl的反应体系中含有1×buffer,0.12mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,3.5 mmol/L Mg2+,1.5UTaqDNA聚合酶和40ng模板DNA。对杨树ISSR-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验,发现引物W95142的最适退火温度为56.1℃,且最适退火温度因引物而异。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术进行杨树种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位奠定了技术基础。     

2015—2016年度12个小麦新品系在淮北地区的生态适应性试验

为了鉴定西北农林科技大学农学院选育的12个小麦新品系在淮北地区的生态适应性,加快小麦育种进程,于2015—2016年在安徽淮北生态区域进行了12个小麦新品系的适应性及抗逆性鉴定试验.结果表明:12个小麦新品种中,有6个品种(品系)比当地对照品种济麦22增产,参试品系产量变幅在7453.5~9046.5kg/hm2,平均产量为8308.5kg/hm2;西农120、西农511表现出抗病性较好,产量三要素协调,综合表现较好.     

3个杨树品种叶片再生体系的建立

以中林2001杨、南林95杨、南抗杨等3个杨树品种叶片为材料，选用15种诱导愈伤组织培养基、9种分化培养基和7种生根培养基，研究不同基因型、激素组合以及外植体状态对再生体系建立的影响。结果表明：3个品种的愈伤组织诱导、分化效果与NAA／6．BA比值有一定相关性．在愈伤组织诱导中NAA／6-BA比值在4：1～5：1之间，愈伤组织分化中NAA／6．BA比值大体在1：4-1：10之间：不同品种在上下表皮气孔数、诱导愈伤、分化再生培养上都存在一定的基因型差异；接种叶片的不同放置方式、叶片上的不同部分对愈伤组织诱导具有显著影响．     

滩地13个杨树无性系遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记手段,研究杨树无性系的遗传多样性。在探讨杨树叶片基因组DNA提纯方法和优化PCR扩增反应体系的基础上,采用18个引物对13个杨树无性系的基因组DNA进行扩增;每个引物扩增的DNA片段数为1～14个,共产生126条带,其中多态带53条,占42%,平均每个引物扩增出3条多态带。结果表明:通过对126条谱带的聚类,分析了供试杨树无性系的系统发育,并通过比较各品种间的特异带或特征带的差异进行无性系鉴别和测定,运用特殊谱带,建立了杨树无性系的分子检索表。     

毛果杨全基因组NBS类型抗病基因分析

病原菌威胁植物的生存繁殖,植物与病原菌之间存在着共进化关系(Holub,2001).植物对外界病原菌的防御体系包括其自身固有和病原菌诱导,其中病原菌诱导的防卫系统的一个重要方面就是表达产物能特异性识别病原菌中相应无毒基因(avirulence gene,avr基因)编码产物的植物抗病基因(resistance gene,R基因).     

3个杨树品种叶片再生体系的建立

以中林2001杨、南林95杨、南抗杨等3个杨树品种叶片为材料,选用15种诱导愈伤组织培养基、9种分化培养基和7种生根培养基,研究不同基因型、激素组合以及外植体状态对再生体系建立的影响。结果表明：3个品种的愈伤组织诱导、分化效果与NAA/6-BA比值有一定相关性,在愈伤组织诱导中NAA/6-BA比值在4:1~5:1之间,愈伤组织分化中NAA/6-BA比值大体在1:4~1:10之间;不同品种在上下表皮气孔数、诱导愈伤、分化再生培养上都存在一定的基因型差异;接种叶片的不同放置方式、叶片上的不同部分对愈伤组织诱导具有显著影响。     

蝴蝶兰“V31”品种组培苗移栽及催花管理技术

正蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)属兰科(Orchidaceae)蝴蝶兰属(Phalaenopsis)多年生草本植物,又名蝶兰,属于气生类洋兰,原产于中国南部及台湾地区、菲律宾、印尼、泰国、马来西亚、澳洲等地,约50余种,与卡特兰、万代兰、石斛兰并称为"四大观赏兰",素有"兰花皇后"之美誉,具有极高观赏价值。近年来我国蝴蝶兰产业不断发展,其栽培规模和推广区域不断扩大,且效益显著,已成     

RNA干涉培育低木质素杨树

采用改良的CTAB法提取南林95杨的基因组DNA，经PCR扩增得到肉桂酰辅酶A还原酶CCR基因的第4个外显子部分序列，通过中间载体pUCCRNAi，构建含正反向干涉片段的pBll21表达载体，导入农杆菌LBA4404。利用叶盘法侵染南林95杨，获得3株转基因植株，经分子鉴定证实干涉片段已导入南林95杨。测定Klason木质素及综纤维素含量的结果显示：转基因植株Klason木质素含量与对照相比平均降低了9．86％，综纤维素含量与对照相比平均增加了3．17％，纤维长宽比明显增加，均表明转基因植株更有利于造纸。     

正交设计在杨树最佳遗传转化体系的建立

本试验以建立的南林95杨高频再生体系为基础,利用正交试验设计,通过GUS组织染色分析法研究了预培养时间、菌液浓度、AS浓度、侵染时间和共培养时间5个因素在4个水平上对南林95杨遗传转化的影响,并探讨了南林95杨转化中添加卡那霉素(Kanamycin)的适宜浓度。结果表明:外植体预培养7d,在含乙酰丁香酮AS200μmol/L、菌液浓度OD值为0.6的农杆菌液中侵染20min,共培养3d为最佳遗传转化体系,适宜的卡那霉素筛选浓度为50mg/L;经GUS染色检测和PCR分析表明,GUS基因已初步整合进南林95杨基因组中。     

RNA干涉培育低木质素杨树

采用改良的CTAB法提取南林95杨的基因组DNA,经PCR扩增得到肉桂酰辅酶A还原酶CCR基因的第4个外显子部分序列,通过中间载体pUCCRNAi,构建含正反向干涉片段的pBI121表达载体,导入农杆菌LBA4404。利用叶盘法侵染南林95杨,获得3株转基因植株,经分子鉴定证实干涉片段已导入南林95杨。测定Klason木质素及综纤维素含量的结果显示:转基因植株Klason木质素含量与对照相比平均降低了9.86%,综纤维素含量与对照相比平均增加了3.17%,纤维长宽比明显增加,均表明转基因植株更有利于造纸。