鸭源多重耐药鼠鼻罗氏菌的分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

鼠鼻罗氏菌是一种常见的条件性致病菌。2020年我国东北地区某农场的鸭出现流黏性鼻液、咳嗽、呼吸急促等散发性呼吸系统症状以及进食量减少、精神低沉等症状。为了确定发病原因,提出针对性的预防和治疗方案,无菌采集发病鸭鼻拭子进行细菌分离培养。分离菌株经培养特性鉴定、染色镜检、生化试验、16S rDNA序列分析,确定为鼠鼻罗氏菌。动物致病性试验结果显示,分离菌株对鸭具有一定的致病性。分离菌株药物敏感性测定结果显示,其对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、红霉素、氟苯尼考、头孢氨苄、恩诺沙星耐药,对多西环素敏感。β-内酰胺类耐药基因(TEM、OXA-23)检测结果均为阴性。结果表明,引发疫情的病原为鸭源鼠鼻罗氏菌,其对多种药物耐药。本研究首次在东北地区禽体内分离出致病性鼠鼻罗氏菌,对多重耐药鼠鼻罗氏菌病的预防和控制具有一定指导意义。     

重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析

本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白（MBP）和C型肉毒梭菌毒素重链C末端（CH_C）的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCH_C。将GMBPCH_C克隆至pET28a-（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCH_C。将rMBPCH_C与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100 μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCH_C在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素（简称天然毒素）的中和效价均可达到1（0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量（MLD）的天然毒素）。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%（2/2）死亡。以上结果说明,rMBPCH_C具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。     

安徽省白羽肉鸡中副鸡禽杆菌的分离鉴定及流行病学分析

本研究试图通过病原分离对安徽省某大型白羽肉鸡养殖公司持续出现疑似鸡传染性鼻炎的鸡群进行确诊,从不同批次发生鸡传染性鼻炎疑似症状的鸡体内分离细菌,经细菌分离、纯化、回鸡试验,共分离到8株细菌,经形态及培养特性、生化试验、血清学特性、16S rRNA基因序列分析等方法对分离的细菌进行鉴定。结果表明所分离的细菌有1株为A型副鸡禽杆菌,7株为B型副鸡禽杆菌,说明在安徽省某地持续引起幼龄肉鸡发生鸡传染性鼻炎的流行中B型致病株是优势毒株,显示新的流行特点。     

猪丹毒丝菌C43-5株菌种毒力检定标准再评价

为进一步完善猪丹毒疫苗毒力检定标准，对猪丹毒丝菌C43-5株在肉肝胃消化汤中的生长规律进行了分析，测定了菌株对猪的最小致死剂量，并对1986、1996、2006、2015年4个冻干代次菌种进行了毒力和免疫原性测定。结果显示：C43-5株在肉肝胃消化汤中培养16 h时活菌数最高，而后进入稳定期，培养19 h后活菌数迅速下降，菌体大量死亡；以3.5×10¹⁰ CFU活菌静脉注射56～63日龄健康易感猪，2只试验猪在4 d内全部死亡；1986、1996、2006、2015年4个冻干代次的C43-5株菌种毒力和免疫原性检定结果均符合要求。同时提出了猪丹毒丝菌C43-5株毒力检定标准的修改建议，为延长菌种的保存期限提供了数据支撑。