瑞氏木霉碳源阻遏相关基因Cre1的分子改造

为了提高瑞氏木霉（Trichoderma reesei）纤维素酶的活力,用类似基因改组的方法改造其碳源阻遏相关基因cre1。以瑞氏木霉基因组DNA为模板PCR扩增cre1基因,用DNaseⅠ消化cre1基因后,回收50-100 bp的DNA片段,用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行无引物PCR,并将PCR产物转入瑞氏木霉原生质体,通过测定滤纸酶活的方法筛选突变菌株,并在NCBI上比对分析突变菌株的cre1基因。结果表明,筛选获得1株纤维素滤纸酶活比出发菌株提高0.7倍的突变菌株cre2-3。cre2-3菌株在液体培养基中呈棉花状,而出发菌株呈小颗粒状,菌株cre2-3发酵液的颜色比出发菌株的更黄亮。推测cre1基因与瑞氏木霉菌株的生长代谢有关。     

一个酿酒酵母呼吸突变株在高糖胁迫下的生理特性研究

MF11a为甘蔗糖蜜乙醇发酵野生型高产菌株MF1002的呼吸突变体,对糖分的利用能力显著高于MF1002。本文研究了这两菌株应激高糖胁迫的生理特性变化。结果表明,高糖培养条件下,MF11a菌株的生长和乙醇发酵受抑制的程度均明显低于MF1002,培养基的葡萄糖浓度为30％和40％时,其最大菌体密度、最高出芽率和乙醇浓度等已显著高于MF1002,表明MF11a较MF1002具有更强的高糖耐受能力。在30％葡萄糖的胁迫培养条件下,两菌株胞内的总超氧化物歧化酶（SOD）活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力,及它们细胞质和线粒体的ATP酶活力均显著上升,说明这五种酶均参与了两菌株的高糖胁迫反应。其中,MF11a的胞内过氧化氢酶活性、过氧化物酶活力、细胞质ATP酶活力在高糖胁迫下的上升幅度显著高于MF1002,表明这三种酶活力可能与MF11a菌株的高糖耐受能力有关,可作为该菌株进一步改造的指导指标。     

南方稻草料栽培平菇高产技术

近年来,南方平菇生产发展迅速,但由于南方湿度大,气候温和,若管理不善,极易感染杂菌,影响产量,甚至导致失败。笔者这里把稻草料栽培干菇管理技术作一介绍,供同行们参考。 1 制备培养料 ①备料:选新鲜黄熟无霉变的稻草,晒干,泡洗后堆成垛,任其自然滴干,1周后取出铡成约6cm的小段。②配方:稻草78％,麸皮18％,蔗糖、石灰、食盐各1％,尿素、磷酸二氢铵各0.5％。③发酵与灭菌:料拌好后覆膜堆沤,至55℃左右翻堆一次,再沤至60℃,即可装袋常压蒸汽灭菌,100℃下保持10小时,并焖一夜后出锅,搬至消毒过的接种室冷却。 2 接种与培养 ①接种:两头接种,接种量为料重的5％～8％,用接种锄轻轻压实,袋口套颈环(用小塑料管或包装带制成,孔径4cm),盖一层用新洁尔灭消毒过的报纸,扎皮筋。②培养:菇房地面撒石灰,再铺上农用膜,将接种好的菌筒呈井字形码放3～4层。发菌期间,室温控制在24～26℃,料温不得超过30℃。若墙栽须翻料降温,注意加强通风换气,光线要暗。18天左右长满菌丝,其间若发现有杂菌污染,可配1∶500倍的多菌灵用注射器分点注射患处。     

十字花科黑腐病菌中GGDEF结构域蛋白差异的in sillco分析

近年来,含有GGDEF结构域（含有甘氨酸（G）（2个）,天冬氨酸（D）,谷氨酸（E）,苯丙氨酸（F）保守氨基酸）的蛋白受到重视,已证实含GGDEF结构域蛋白在细胞信号转导、生长和致病性等方面发挥了重要作用。十字花科黑腐菌8004菌株（Xanthomonas campestris pv. campestris str. 8004,Xcc8004）有32个基因编码含GGDEF结构域蛋白,实验证明其中部分蛋白与xcc致病性、胞外酶产生、生物膜形成和泳动等生命活动相关。本文利用互联网提供的生物信息学资源,对Xcc8004不同功能含GGDEF结构域蛋白进行生物信息学分析,着重分析其结构域架构。对蛋白结构域架构整体比较显示,这些蛋白的整体结构域架构具有多样性,共有结构域架构仅有PAS4-GGDEF．EAL（分布于参与致病的蛋白中1;对结构域架构局部比较显示,在参与致病性的含GGDEF结构域蛋白中,PAS4-GGDEF和GGDEF．EAL为共有结构域架构;在参与内切葡聚糖酶产生的蛋白中,PAS4-PAS4、PAS4-GGDEF和GGDEF—EAL为共有结构域架构。本研究结果将为蛋白质功能预测提供线索。     

试述罗汉果开发急需解决的几个问题

罗汉果是广西特产 ,在市场上有很好的应用前景及经济效益 ,但近年来 ,由于栽培品种退化及病虫害严重 ,使罗汉果产量和品质都受到影响 ,不能满足市场需要。另外 ,罗汉果的应用研究和理论研究尚处于初级阶段 ,产品种类也不多 ,市场潜力还有待进一步发掘 ,当前罗汉果开发急需解决如下几个难题。1　优良品种稀少1 .1　传统良种简介　 1长滩果　果卵状椭圆形、长椭圆形或长圆形。长 7～ 9cm,直径 5～ 6cm。味清香甜。品质优 ,但对栽培条件要求较严 ,抗逆性较弱。 2拉江果　果梨型或葫芦形。长 6～ 7cm,直径 5～ 6cm,果皮厚 0 .3～0 .6cm,味清甜。…     

冬种绿肥对新会橙果园土壤蛋白酶活性的影响

绿肥在农业上利用历史悠久 ,对绿肥作用的研究已有大量的报道 ,但绿肥对新会橙果园土壤蛋白酶活性的影响至今仍未见报道。本文就绿肥对新会橙果园土壤蛋白酶活性及土壤肥力的影响 ,进行了探讨 ,为新会橙果园的栽培管理提供理论参考依据。1　材料与方法1 .1　材料　 1 995年～ 2 0 0 0年 ,在广西百色地区田东县祥周乡百渡村新会橙幼龄果园连续五年冬种紫云英 80 hm2 ,平均年产绿肥鲜重 2 30 0 kg /667m2 ,于次年春节前全部翻压作基肥。 2 0 0 0年2月 1 5日 (翻压绿肥前 ) ,选择种绿肥园与不种绿肥园的新会橙树 (树龄为 5年生 ,枳砧 )各 1 0株…     

里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造

[目的]用分子改造的方法改造里氏木霉(Trichoderma reesei的纤维二糖水解酶基因cbh1,提高其纤维素酶活力,为工业化生产纤维素酶提供参考.[方法]用DNaseI消化里氏木霉cbh1,回收100 bp左右的片段后用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行PCR扩增,将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体,使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组.通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株,在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列.[结果]经克隆测序获得基因片段大小为637 bp,与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88‰98％,确定为里氏木霉cbh1的基因片段.经DNaseI消化15 min、T4 DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因.将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体,得到cbh1基因突变体库.从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1.7518倍的突变菌株E2-1.序列比对分析发现,与出发菌株相比,突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变,其中5个碱基为置换突变,8个碱基为缺失突变,1个碱基为插入突变,分布于cbh1基因的9个位置.[结论]改造后的cbhl因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组,进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力.