牡丹品种凤丹白子叶离体再生研究

探讨了不同的消毒方式及消毒时间对牡丹成熟胚萌发诱导的影响,以及不同的植物生长调节物质、培养时间和蔗糖浓度对牡丹子叶愈伤组织诱导、增殖分化及分化苗生根的影响.结果表明,牡丹种子的最佳消毒方法是在0.1％ HgCl2中消毒10 min;牡丹子叶在MS+2 mg/L 2,4-D+0.5 mg,/L6-BA+ 3％蔗糖配方的培养基中出愈率最高,为93％;牡丹子叶来源的愈伤组织在MS+1.0mg/L2,4-D+0.5 mg/L 6 - BA +3％蔗糖配方的培养基中培养60 d时的分化情况最好,分化率达到78％;在附加了0.2 mg/L6 - BA+1.0 mg/L IBA和2.5％蔗糖的1/2MS培养基中,再生苗的生根率可达56％,平均根数4.25条,平均根长4.31 cm.     

豌豆清蛋白１（PA１）基因的克隆及对苜蓿的转化

 本研究用ＰＣＲ 方法从豌豆（食荚大菜豌）克隆出富含硫氨基酸、同时具有抗虫作用的双功能的蛋白质基因－豌豆清蛋白１（ＰＡ１）基因,并构建了植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡｌ３０１－ＰＡ１。采用农杆菌介导法转化了紫花苜蓿,并对其转化体系进行了优化,得到了多个转基因胚性愈伤组织及其再生植株。ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测表明,ＰＡ１基因和潮霉素抗性基因已被整合到了宿主细胞。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 分析表明该基因在再生植株中有一定表达。游离氨基酸分析表明,ＰＡ１基因的表达转基因苜蓿中蛋氨酸和半胱氨酸的含量从０．１％提高到０．４％。     

不同移栽时期对‘凤丹’牡丹植株生长效应及其综合评价

【目的】探究‘凤丹’牡丹种苗的最适移栽时期,为其丰产栽培技术提供参考。【方法】以3年生‘凤丹’牡丹实生种苗为试验材料,设置8个移栽时期,通过大田对比试验,分析移栽后根系活力、叶片光合性能及生物量的变化;采用主成分分析和综合评价的方法对不同移栽时期的成苗效果进行评价。【结果】移栽期可能通过移栽时气温、土壤温度和移栽后土壤积温等环境因素影响‘凤丹’牡丹新根和植株的发育,适时移栽显著促进牡丹苗体的生长发育。在不同的移栽时期,‘凤丹’牡丹植株生长期间的新根总数、木质化新根数、根系活力、叶面积、叶片SPAD值、净光合速率、枝条粗度、根生物量、枝条生物量、总生物量和壮苗指数均有一定差异,而枝条长度和根冠比没有显著差异。9月29日与11月28日移栽相比,单株木质化新根质量和叶面积分别增加了90.26%和51.22%,根系活力和净光合作用速率分别提高了93.53%和60.98%,单株生物量增加了46.00%。经通径分析、主成分分析和综合评价表明:9月29日移栽的‘凤丹’牡丹成苗效果最好。【结论】本研究依据植株生物量、壮苗指数与移栽期气象环境要素的依赖关系,明确9月中旬至10月下旬,日均气温15~20℃气侯条件,是‘凤丹’牡丹的最适移栽期。     

草木樨状黄芪A4转化系原生质体培养研究

建立了草木樨状黄芪A4转化系原生质体再生植株的实验体系.以草木樨状黄芪发根农杆菌A4转化系再生植物幼叶为材料,通过酶解法,游离出大量有活力的原生质体,原生质体经培养持续分裂形成了愈伤组织,并分化出再生苗.比较了不同酶解时间、培养密度和培养基对原生质体分裂和再生植株的影响.结果表明,原生质体植板密度为3×105个/mL,采用液体浅层培养,在附加了2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L 6-BA、0.3mol/L甘露醇和2%蔗糖的DPD培养基中,可获得最高分裂频率,达32.4%.原生质体持续分裂形成愈伤组织可高频[(91.75±3.1)%]分化出再生苗.甘露碱纸电泳和PCR分析表明,外源基因T-DNA在原生质体来源的再生植株中仍然存在.     

中华枸杞叶片离体再生技术初探

为探索中华枸杞(Lycium chinense Mill.var.chinense)叶片离体再生技术,通过设置不同消毒时间梯度,研究了0.1%升汞溶液对中华枸杞叶片的消毒效果;以MS为基本培养基,添加6-BA、2,4-D、IAA等激素,研究了不同激素浓度配比对中华枸杞叶片离体再生的影响。结果表明,用0.1%升汞溶液消毒叶片8 min,污染率最低,是中华枸杞叶片的最佳消毒时间。基本培养基中添加1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L2,4-D是诱导愈伤组织的最佳激素浓度配比;基本培养基中添加1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA是诱导愈伤组织分化的最佳激素浓度配比;基本培养基中添加0.2 mg/L IAA+0.6 mg/L NAA是诱导丛生芽生根的适宜激素浓度配比。利用组织培养技术可有效实现中华枸杞叶片离体再生和快速繁殖,为其工厂化育苗和优良品种的选育奠定基础。     

不同植物生长调节剂对丹参组培快繁的影响

以丹参无菌苗叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同种类和浓度的植物生长调节剂对丹参叶片愈伤组织诱导、芽诱导及根诱导的影响.结果表明:MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA利于丹参叶片诱导愈伤;诱导愈伤分化为芽的最适培养基为MS+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA;诱导生根的最适培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA.该试验为丹参的工厂化生产奠定了理论基础.     

毛头鬼伞中一条新28S rRNA的发现及其同源性分析

本研究从担子菌毛头鬼伞（Coprinus comatus）菌丝中分离获得一条新的28S rRNA序列,序列长度为906bp（GenBank accession No.GU568178）。该序列是我们前期在从毛头鬼伞中克隆一种烟草花叶病毒（TMV）的抗性蛋白基因y3时意外获得的一条非目的条带。将此获得的序列通过NCBI的BLAST,以及与其同源序列进行Clustal w和MEGA聚类分析,证实该序列是28S rRNA,同时还发现毛头鬼伞的系统进化关系比较离散。此外,在这一新28S rRNA与TMV的抗性蛋白基因y3之间发现有两个同源区段有可能是PCR扩增y3基因时出现非目的条带的原因。在这两个同源区段中,其一区段与克隆y3基因时所用的PCR引物之一有较高的相似性,另一区段也是一般PCR引物的类似物。本研究中新28S rRNA序列的获得是PCR扩增中出现非目的条带的新例,该序列的发现及聚类分析的结果有助于真菌基因组学研究及真菌生物分子分类系统的建立。     

溴化锂处理对大豆幼苗生长的影响

为明确溴化锂对大豆的毒害作用,以濮豆129为供试大豆品种,设置0、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3、10-2、10-1 mol/L 8个溴化锂浓度处理进行水培试验,通过测定不同浓度溴化锂浸种后大豆幼苗平均株高、鲜质量、根长、叶绿素含量和可溶性蛋白含量,研究了溴化锂对大豆幼苗生长的影响。结果表明:10-7 mol/L溴化锂处理有效促进了大豆幼苗的生长,其平均株高和平均根长分别为43.18cm和4.97cm,叶绿素含量和可溶性蛋白含量分别为2.34mg/g和368.11μg/g;当溴化锂浓度增加到10-1 mol/L,大豆幼苗受到严重损伤,几乎不能生长。总之,溴化锂对大豆幼苗的生长具有低浓度促进、高浓度抑制的效应。     

一种快速有效提取植物和真菌DNA和RNA的简易方法

本文利用一种真菌核酸的快速提取方法提取了3种真菌的DNA和RNA,并将该法略作改进用于烟草DNA和RNA的提取。同时,通过低温保藏试验评价核酸提取液和提取产物的稳定性和有效性;利用凝胶电泳、PCR和RT-PCR等方法比较分析核酸质量;并将提取效果与传统方法或试剂盒的提取效果进行比较,以分析其有效性。结果表明,改进后的提取方法是一种简单、方便和有效的实验方法,不仅可用于真菌也可用于植物DNA和RNA提取,用这种方法提取得到的DNA和RNA在低温保存条件下比较稳定,能较长时间保持其原有活性。     

乙醇酸氧化酶基因超表达载体的构建与水稻的遗传转化

通过RT-PCR从水稻cDNA中扩增得到乙醇酸氧化酶基因(GLO)的完整序列。构建组成型超表达载体并转化水稻,经初步PCR和Southern杂交检测,确认已得到超表达转基因植株。酶活检测表明,其GLO活性最高可提高约70%。GLO基因超表达植株的获得为进一步研究GLO以及光呼吸的生理功能奠定了基础。