绵羊WNT5A基因克隆及其组织表达分析

WNT5A(Wnt family member 5A)参与了多种细胞的增殖、凋亡和分化等生物学过程,在乳腺形态发生、毛囊发育等方面发挥了重要作用。该试验利用RT-PCR获得绵羊WNT5A基因的CDS区,分析WNT5A蛋白的结构特征并利用RT-qPCR检测WNT5A基因在9个组织中的表达情况。绵羊WNT5A基因的CDS区全长1062 bp,编码353个氨基酸。该蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,β转角、延伸链贯穿于整个蛋白质结构中。String分析结果表明,WNT5A与卷曲蛋白受体、低密度脂蛋白相关蛋白和受体酪氨酸激酶有相互作用。RT-qPCR研究结果表明,WNT5A基因表达具有组织特异性及品种特异性。WNT5A基因在绵羊心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、卵巢、背最长肌、乳腺和皮肤9个组织中均广泛表达,其中在皮肤中的表达量高于其他组织(P<0.05),而在脾脏中表达量较低。它在甘肃高山细毛羊皮肤、乳腺、背最长肌、肾脏、肺脏、脾脏和肝脏中的表达量高于小尾寒羊(P<0.05),而在甘肃高山细毛羊卵巢中的表达量低于小尾寒羊(P<0.05),在心脏中该基因的表达量无差异(P>0.05)。该结果为深入研究绵羊WNT5A基因的功能提供了重要依据,同时也丰富了绵羊基因组内容。     

流感病毒气源性传播研究进展

流感病毒是现今世界流行最为广泛、传播最为迅速的人兽共患病毒之一,而气源性传播是流感病毒最有效的传播方式.流感病毒的相关基因,尤其是相关基因的关键氨基酸位点对其自身是否具有气源性传播能力具有决定性的作用.外界环境的改变会直接影响病毒气溶胶颗粒形成的数量和大小,进而影响传播效率.目前,经过长期的筛选和比较,将豚鼠和雪貂作为研究流感气源性传播的模式动物,根据不同目的或者单独使用或者协同实验.文章通过对病毒本身的生物学特性以及外界环境对气源性传播产生的影响进行了初步总结,对进行气源性传播的实验动物给出了综合评价,一方面为研究者提供较为全面的总结,另一方面为防治流感提供依据.     

小尾寒羊母羊不同繁殖阶段瘤胃发酵及微生物菌群特征分析

为探究小尾寒羊母羊不同繁殖阶段瘤胃发酵功能及微生物菌群变化特征对其繁殖性能的影响，本研究对8只3岁小尾寒羊母羊在空怀期(配种前11～30 d)、妊娠期(怀孕后112～148 d)和泌乳期(分娩后40～48 d)瘤胃的挥发性脂肪酸(VFAs)、氨态氮(NH3-N)含量及微生物菌群结构特征测定并进行相关性分析。结果表明：瘤胃总VFAs和乙酸浓度在泌乳期高于其他时期(P<0.05),NH3-N含量在妊娠期最高。不同繁殖阶段瘤胃菌群组成差异分析表明：在门水平，绿弯菌门和纤维杆菌门在泌乳期高于妊娠期(P<0.01)；在属水平，普氏菌属＿1的相对丰度在妊娠期高于泌乳期(P<0.01),[Eubacterium]＿ruminantium＿group、莫雷拉和纤维杆菌属的相对丰度在空怀期低于泌乳期(P<0.05)，而幽门螺杆菌和丹毒丝菌＿UCG-009在空怀期高于泌乳期(P<0.05)。相关性分析表明，瘤胃微生物菌群与VFAs、NH₃-N存在显著相关性(P<0.05)。由此可见，小尾寒羊母羊在妊娠期及泌乳期的瘤胃VFAs、NH3-N含量及纤维素...     

鸡Toll样受体15单克隆抗体的制备及其初步应用

旨在制备鸡Toll样受体15（ChTLR15）的特异性单克隆抗体（mAb）,并初步应用。利用PCR技术扩增ChTLR15第162-386位氨基酸,克隆于载体pET-30a中进行诱导表达,获得高纯度的重组ChTLR15（162-386 aa）蛋白。然后采用皮下多点注射方式将ChTLR15免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠,常规获得针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体。运用原核表达系统对ChTLR15基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的ChTLR15抗原表位进行鉴定。利用6C7株单克隆抗体以激光共聚焦显微技术对鸡HD11细胞进行定位,同时,利用免疫组化技术确定ChTLR15在鸡部分组织中的分布情况。结果表明：成功构建重组质粒pET-30a-ChTLR15（162-386 aa）,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约26 ku的重组蛋白ChTLR15（162-386 aa）。方阵试验表明,最适血清稀释度为1：6 400,最适抗原包被浓度为0.35 μg·mL^-1。采用有限稀释法进行4轮筛选,最终获得4株针对ChTLR15蛋白的单克隆抗体,将其以2G4、6C7、6D10、7C4进行命名。2G4与6C7的亚类为IgG2a,6D10与7C4的亚类为IgG1。Western blot结果显示,4株单抗均能与ChTLR15发生特异性反应,而不与其他受检蛋白反应。运用原核表达系统对ChTLR15（162-386 aa）进行截短表达,对ChTLR15单克隆抗体的抗原表位进行鉴定。结果显示,单抗2G4与7C4识别的抗原表位为²³⁰QLGTVLEF²³⁷,6C7与6D10识别的抗原表位为²⁴⁵EMDLLS²⁵⁰。细胞定位结果显示,ChTLR15蛋白位于细胞表面。免疫组化结果显示,健康对照鸡肝、脾、肺、肾均有微弱阳性染色,禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）感染鸡肝、脾、肺、肾阳性染色有所增强。本研究通过淋巴细胞杂交瘤技术成功获得4株抗ChTLR15蛋白的单克隆抗体,通过截短免疫原蛋白法对其识别的线性表位进行鉴定,可用于进一步研究ChTLR15的结构与功能,为后续信号通路、免疫机理、疫苗研发等相关领域的研究提供了有力工具。     

鸭源H5亚型禽流感全禽源分子标记疫苗候选株的构建

为了开发用于南方水禽且适合血清学监测的H5亚型禽流感疫苗,作者通过反向遗传技术,删除A/mallard/Huadong/S/2005(H5N1,S株)病毒HA编码多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,分别与A/duck/England/1/1956(H11N6,E株)和A/Chicken/Shanghi/F/98(H9N2,F株)的NA组合,再以本室禽源高产病毒F株的6个内部片段为骨架,构建全部基因都来自禽流感的疫苗株.成功拯救出2株重组病毒,分别命名为rH5N6/F和rH5N2/F,并引入分子标记N6和N2.重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,且rH5N6/F更适合在鸡胚中生产,对SPF鸡和鸡胚无致病性.重组病毒在clade2.3.4毒株中具有很好的抗原代表性,引入的分子标记有利于血清学监测的区分,为防控水禽H5亚型禽流感提供了良好的疫苗候选株.     

犬 猫流感病毒感染与疫苗研究进展

A型流感病毒是正黏病毒属的成员,是在人、猪、马和家禽上有重大经济意义的疾病。病毒的种间传播是其生态学和流行病学上的一个重要特征。犬、猫经常与野鸟、家禽以及动物肉产品紧密接触,     

几种乡土树种光合生理特性研究

采用美国LI—COR公司生产的LI—6400便携式光合测定系统对几种乡土树种的光合生理特性进行了研究。结果表明:①椿叶花椒、构树、臭椿和翅荚木的光补偿点分别为45.8、40.5、36.4和17.8μmol/(m2.s),光饱和点分别为607.3、624.9、573.4和373.8μmol/(m2.s),表观量子利用效率分别为0.055 7、0.046 6、0.044 1和0.047 0;②CO2补偿点分别为91.3、77.3、83.1和81.5μmol/mol,CO2饱和点分别为1 668.2、1 077.9、1 518.1和1 251.7μmol/mol,羧化效率分别为0.071 2、0.081 9、0.087 2和0.072 7;③4个树种的光合能力为椿叶花椒>构树>臭椿>翅荚木。     

用子房培养法克服杨树与柳、榆杂交幼胚的败育

<正> 杨树与柳树属间杂交、杨树与榆树科间杂交均属远缘杂交,由于亲本间的遗传和生理机制差异,造成生殖隔离,产生杂交不育现象。但这种不育的程度是不相同的,通常是杂合子不能形成健全的种子,半途天亡。表现在种子未成熟前整个果穗脱落,很难获得杂种苗木。国内曾有过青、黑杨派与柳属杂交获得苗木的先例,但对难成功的白杨派与柳属杂交,杨榆杂交迄今未见报道。为了改良杨树的生长与适应性,我们于1978—1979年先后开展了银白杨×旱柳、银白杨×白榆、旱柳×钻天杨、旱柳×美洲黑杨的杨与柳、榆的远缘杂交试