大豆花粉管通道技术转化雪花莲凝集素(GNA)基因

采用花粉管通道技术，用雪花莲凝集素基因（Galanthus nivalis agglutinin，GNA）转化吉林省主推品种吉林20号、吉林30号、吉林45号品种大豆。通过接蚜鉴定和PCR鉴定，从所获得的种子苗中筛选出转基因植株。对转基因植株的后代进行分子生物学鉴定：（1）PCR分析，转基因植株97TGR1和97TGR2的T2代表现阳性，第5代表现阳性纯合；97TGR1、97TGR2和98FD1～98FD20的T3代Western blotting检测结果证明，GNA基因在蛋白质水平有表达，最高表达量占总可溶性蛋白的0．7％；97TGR1、98TGR2和99JI45 TGR2的Southern blotting检测结果显示，GNA基因已插入大豆基因组；（2）遗传学分析，97TRG1的T2代呈孟德尔3：1分离，97TGR2的T3代出现种皮颜色不规则分离。经过抗蚜性鉴定和连续的筛选，获得抗性纯系；（3）抗蚜性鉴定，转基因株的T1、T2世代转基因植株可抑制蚜虫繁殖量50％～90％；（4）品系鉴定，转基因大豆的抗蚜性达到农学标准抗（R）和高抗（HR）水平；大面积环境释放试验自然感蚜鉴定，转基因系蚜虫发生的高峰比对照延迟，高峰期过后群体蚜量的下降速度也比对照快。本研究认为，大豆花粉管通道技术可以利用于大豆的转基因研究和应用中，GNA基因在改良大豆的抗蚜性上是可取的。