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灵芝LZ-8在烟草中的表达及产物特性的初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
将从灵芝中克隆的LZ-8基因构建成原核表达质粒pET-30a-lz8，在大肠杆菌BL21中表达。SDS-PAGE表明其分子量约为14kD，与推算出的氨基酸分子量相似。经金属镍离子螯合柱纯化后的原核表达产物为单一条带，纯化产物免疫兔子获得了高效价的抗血清。将该基因亚克隆到植物双元表达载体中，用农杆菌介导的方法转化烟草。经ELISA实验定量测定，重组LZ-8达到了烟草可溶性蛋白的0．18％（每克新鲜叶片约含149．82μgLZ-8重组蛋白）。体外活性检测表明，重组蛋白能有效地提高VeroE6细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）基因的mRNA转录水平，具有免疫调节相关功能。 相似文献
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盐胁迫下短芒大麦cDNA文库的构建 总被引：2，自引：1，他引：2
为了克隆与研究盐胁迫相关的基因,以盐胁迫后的短芒大麦叶片为材料,用Trizol一步法提取总RNA。Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA。反转录合成第一链cDNA和第二链cDNA。cDNA纯化后,与λZAP表达载体连接,体外包装后得到盐胁迫下短芒大麦cDNA文库,其重组率达96％,滴度为2×10~7pfu/mL,插入片段长度0.5～3.0kb。 相似文献
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Ⅲ型干扰素(interferon lambda,IFN-λ)在机体抗病毒固有免疫、适应性免疫、黏膜免疫及抗肿瘤免疫等方面发挥重要作用。本研究利用RT-PCR技术从猪肺巨噬细胞CRL2845中扩增获得猪IFN-λ1基因(pIFN-λ1),并进行遗传进化分析和信号肽预测;将含信号肽的pIFN-λ1基因分别克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,通过常规的质粒转化、阳性菌落筛选、质粒提取及酶切鉴定,获得重组质粒pcDNA-pIFNλ1;利用脂质体转染CRL2845细胞,转染48h后通过qRT-PCR、Western blot、间接免疫荧光方法分析pIFN-λ1表达及胞内定位;收集转染细胞总RNA,通过qRTPCR方法分析OAS1、ISG15、PKR、IFITM3等干扰素刺激基因的表达,并利用含报告基因的痘病毒VTT-EGFP感染瞬时表达pIFN-λ1的CRL2845细胞,通过流式细胞术分析pIFN-λ1抗痘病毒效果。结果显示,成功在猪肺巨噬细胞中扩增获得pIFN-λ1基因,并在CRL2845细胞内成功表达;瞬时表达后选择性诱导OAS1、ISG15的表达,并可抑制约38%的痘苗病毒感染CRL2845细胞。结果表明,瞬时表达pIFN-λ1能选择性诱导部分干扰素刺激基因的表达,且具有抗病毒活性,为深入研究猪IFN-λ1在宿主抗病毒免疫和黏膜免疫中的作用机理及其应用奠定基础。 相似文献
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微量DNA提取法是目前以PCR法鉴定转基因番茄植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法.该方法需约1 h即可完成植物DNA的提取,样品用量仅为30-100mg,产量可达30-80μg/g,粗提DNA(溶于10μlTE缓冲液)不必经过纯化,用TE缓冲液稀释5-10倍即可直接用于PCR分析. 相似文献
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为了对陕西省和辽宁省部分地区羊源蜱类及其携带病原体的流行情况进行分析,本试验采集了288份羊源蜱样本,采用形态学观察鉴定蜱种;采用分子生物学方法扩增巴贝斯虫18S rRNA、伯氏疏螺旋体16S rRNA、斑点热群立克次体ompA和无形体16S rRNA的基因序列,并结合核苷酸序列分析,确定所收集蜱样本中各类病原体的流行情况。结果显示,经鉴定288份羊源蜱样本均为长角血蜱。陕西省144份长角血蜱中携带巴贝斯虫、斑点热群立克次体和无形体,感染率分别为0.69%、21.53%和77.78%,且巴贝斯虫和斑点热群立克次体均与无形体复合感染;其中长角血蜱中携带Babesia microti、Candidatus Rickettsia longicornis、Uncultured Rickettsia sp. QH-122、Rickettsia endosymbiont of Haemaphysalis longicornis、Uncultured Anaplasma sp. ZJ06/2009、Anaplasma marginale、Anaplasma capra共7种病原体。辽宁省144份长角... 相似文献
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