东亚钳蝎神经毒素BmK CT三维结构分子建模及晶体生长条件的初步筛选

东亚钳蝎是一类广泛分布于我国且具有重要药用价值的野生资源.其氯离子通道神经毒素(BmK CT)对人脑神经胶质瘤细胞具有靶向特异性的抑制作用.利用SWISS-MODEL服务器对BmK CT进行蛋白质原子结构的同源建模,利用Insight II软件包对建模结果做能量最小化和分子动力学优化,获得最佳候选模型.三维结构对比分析表明,BmK CT与以色列蝎氯通道毒素(Cltx)三维结构极为相似,均由一个α-helix和两个反向平行的β-sheet构成,但BmK CT属于βαβ型,而Cltx属于αββ型.表面静电势分析表明,BmK CT和Cltx分子表面分布着大量正电势,暗示两分子功能相似,且其中的碱性氨基酸及产生的正电势对其与受体结合起决定作用.采用晶体生长试剂盒(Crystal Screening Kit)中的51个缓冲液配方筛选BmK CT的结晶条件,在7号配方(1.4 mol/L 乙酸钠,0.1 mol/L 甲次砷酸钠,pH 6.51中筛选到柱状六边形晶体.     

东亚钳蝎昆虫特异性毒素BmK IT三维结构建模及晶体生长条件初筛

利用SWISS-MODEL服务器对BmK IT毒素进行三维结构同源建模,结果表明,BmK IT三维构象与BmK IT-AP、Bj-xtr IT、BmKβIT在二级结构的排列顺序和空间结构上相似,并且这四者的C末端对于蝎昆虫神经毒素特异作用于昆虫钠离子通道至关重要。根据表面静电势分析,推断在果蝇的钠通道D2区的一个额外涉及兴奋性蝎抗昆虫毒素对该通道的选择性识别的区域应呈现正电势。接着,采用Hampton Research公司的晶体生长试剂盒中的50个缓冲液配方筛选BmK IT的结晶条件,在温度为28℃,缓冲液配方为0.1 mol/L磷酸二氢钾、0.1 mol/L一水合磷酸二氢钠、0.1 mol/L一水合吗啉乙磺酸、2.0 mol/L氯化钠(pH6.5),时间为6个月时生长出五边形晶体。研究结果将为从分子水平上揭示其结构与抗农业虫害的功能关系奠定基础。