南美白对虾霍乱弧菌的分离与鉴定研究

目前南美白对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ）人工养殖中,病害多发,本研究从一养殖场中采集发病病虾,从患病对虾肝胰腺中分离病原菌．对分离菌株进行形态观察,生理生化测定并结合１６ＳｒＤＮＡ序列分析进行鉴定,结果表明,该分离菌为霍乱弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａ）,回归感染证明其为致病菌,可导致南美白对虾死亡．通过纸片琼脂扩散法对３２种抗生素进行药物敏感试验,病原菌对氟苯尼考、氯霉素、利福平、诺氟沙星等１０种抗生素敏感,对头孢呋辛、头孢曲松等７种药物中度敏感,对羧苄西林、青霉素等１５种药物具有抗性．通过二倍稀释法测定筛选５种常用抗生素最小抑菌浓度,结果表明诺氟沙星抑菌效果最强,最小抑菌浓度最小＜０.２４４１μｇ／ｍＬ．     

无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗的制备及免疫效果评价

为了研究无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗对罗非鱼链球菌病的免疫保护作用,本研究通过PCR和重叠延伸拼接技术(SOEing)获得融合基因Sip-GAPDH,连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)制备DNA疫苗,通过背鳍肌肉注射方式免疫吉富罗非鱼,免疫后第7、28天取样,采用PCR及RT-PCR方法检测pcDNA-Sip-GAPDH在各个组织(包括肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏)中的表达情况。采用ELISA、Real-time PCR法和体外攻毒法分别分析各实验组不同时间血清抗体效价、免疫基因(IgM、IL-1β和CD8)表达变化规律和相对保护率,研究该嵌合性疫苗对吉富罗非鱼的保护效果。结果显示,实验组在免疫接种第7和第28天时,注射点周围的肌肉、脑、头肾、脾脏、鳃和肝脏均能检测到嵌合性质粒,实验组罗非鱼血清抗体效价均高于对照组并于21 d时达到峰值(1∶4 096);qPCR数据表明,实验组鱼体胸腺、头肾和脾脏的IgM、IL-1β和CD8基因的mRNA表达量均出现了上调,并且在胸腺、头肾和脾脏中的表达量分别在免疫后第12和第48 h达到峰值;免疫后42 d进行人工攻毒后计算免疫保护率为93.3%。以上研究结果表明,本研究构建的无乳链球菌Sip-GAPDH嵌合核酸疫苗在罗非鱼链球菌病防治中具有潜在的应用价值。     

草鱼出血病分子流行病学及GCRV多样性研究

[目的]分析不同基因型GCRV分离株与患草鱼出血病草鱼症状的相关性。[方法]采用RT-PCR检测患病草鱼,应用生物信息学方法分析基因型内和基因型间不同分离株间的差异。[结果]对近3年来草鱼出血病分子流行病学分析发现,患草鱼出血病病鱼多为"肠炎型"症状,且检测发现其病原多属于GCRV基因型Ⅲ型。对GCRV的多样性分析表明,不同分离株同源蛋白的同源率高达93%以上,却被给予完全不同的名称,给GCRV多样性研究带来一定的困难;同一基因型不同分离株同源蛋白间的变异位点较少,且功能位点发生变异的更少;不同基因型不同分离株同源蛋白间的保守位点较少,且这些保守位点中只有极少数位点为功能位点;不同基因型分离株同源结构蛋白间存在较大的差异,且同源非结构蛋白间的差异更为显著。[结论]草鱼出血病不同临床症状可能与其病原基因型不同有关。     

吉富罗非鱼mIgD基因恒定区序列的原核表达及多克隆抗体的制备

实验采用原核表达方法成功获得吉富罗非鱼m Ig D基因恒定区融合蛋白,同时利用纯化的MIGD融合蛋白,制备了兔抗MIGD多克隆抗体。ELISA检测MIGD融合蛋白效价高达1∶512 000,说明MIGD蛋白具有较强的免疫原性,可以诱导罗非鱼机体产生相应较强的免疫应答。     

恩诺沙星对红笛鲷血清中碱性磷酸酶活力、抗体IgM含量、溶菌酶含量及其抗菌能力的影响

以间隔200mg／kg的恩诺沙星设置8个浓度梯度腹腔注射红笛鲷进行急性毒性实验，测得其安全浓度为67．56mg／kg，参考安全浓度及日常生产给药量取0、20、40、80mg／kg鱼体重恩诺沙星，以腹腔注射及拌料投喂两种不同给药方式，研究恩诺沙星在该浓度范围内对红笛鲷血清中一些免疫指标及其感染细菌后死亡率的影响。实验结果表明恩诺沙星在40m非g浓度组中提高AKP活力、IgM含量、溶菌酶含量的同时可提高红笛鲷抵抗外界细菌感染的能力（P〈0．05）。当用药浓度不足（20mg/kg组）或浓度过高（80mg／kg组），虽然对AKP活力和IgM含量也有影响，但在投喂组中，红笛鲷体内的IgM含量受抑制显著，经腹腔注射2．3×10^7 CFU／mL溶藻弧菌 （ Vibrio alginolyticus ）攻毒后，注射组中相对生理盐水组的死亡率55％；20、40、80mg／kg浓度组红笛鲷的死亡率分别为45％、30％、50％；投喂组中，0、20、40、80mg，kg浓度组红笛鲷的死亡率分别为55％、40％、30％、60％；40mg／kg浓度组中抗菌能力增强；20、80mg／kg浓度组中红笛鲷抗菌能力不受影响或有负面影响。     

人工养殖鲍的疾病及其防治技术

鲍肉质鲜美，营养丰富，且具有较高的药用价值，自古以来誉以海之珍品，是目前全球海水养殖动物中名贵的品种之一。我国近几年来也开始发展鲍的人工养殖，特别是福建、辽宁、山东、广东、海南等地沿海，鲍养殖发展非常迅速，各地已形成了较大的生产规模。然而，随着鲍养殖规模的不断扩大和集约化程度的提高，水质环境和养殖条件难以满足需要，     

中草药对建鲤非特异性免疫功能的影响

用添加中草药的鲤配合饲料饲喂建鲤(Cyprinnus var．Jian)后,测定了建鲤非特异性免疫指标。饲喂药饵Ⅰ 10、15、30 d后,氯化硝基四氮唑兰(NBT)阳性细胞数分别为 27±3．45、39±6．04和 38±4．81,溶菌酶活力分别为 0．013±0．0017、0．018±0．0053和 0．021±0．0037;饲喂药饵 Ⅱ 10、15、30 d后,NBT阳性细胞数分别为 30±2．23、87±8．57和82±7．42,溶菌酶活力分别为0．015±0．0020、0．044±0．0017和0．033±0．0011;而对照组NBT阳性细胞数分别为28±2．18、27±4．05和29±3．56,溶菌酶活力分别为0．013±0．0010、0．012±0．0031和0．015±0．0046。结果表明,饲喂药饵Ⅱ 15、30d后的NBT阳性细胞数和溶菌酶活力均显著高于对照组(P＜0．05)。因而,本配方的中草药按质量分数为1．0%的量加入到饲料中,既能明显提高建鲤的吞噬细胞、中性粒细胞和巨噬细胞的数量,又能提高其溶菌酶的活力,从而明显提高建鲤的非特异性免疫能力。     

急性降温对凡纳滨对虾血液生化指标 及细胞免疫指标的影响

为了解凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)对急性降温的耐受性,运用生化分析法和流式细胞术,研究了急性降温对凡纳滨对虾8项血液生化指标及6项细胞免疫指标的影响。结果显示,当水温从30℃降至16℃时(降温速率-4℃/h),凡纳滨对虾血糖含量显著下降,其他7项生化指标包括总蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、胆固醇、甘油三酯、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性/含量均有不同程度的上升,其中总蛋白的上升达到显著水平。细胞免疫指标包括血细胞总数、活性氧含量、非特异性酯酶活性在降温后显著下降,细胞凋亡率显著上升,3类血细胞的组成比例则无显著变化。表明急性降温可能导致凡纳滨对虾血糖迅速消耗,蛋白质、脂肪的分解作用加强,细胞膜通透性的增加,引起组织损伤及相关代谢酶的外泄,并使细胞免疫功能受到损害;也说明凡纳滨对虾对急性降温非常敏感,会发生一系列生理功能的紊乱和免疫功能的下降。     

军曹鱼幼鱼耗氧率与窒息点的研究

对平均体质量为16.0g～18.4g的军曹鱼在不同水温和盐度条件下的耗氧率进行了测定。结果表明,水温对军曹鱼的耗氧率有显著影响。盐度29‰时,水温从17℃上升到32℃,军曹鱼的耗氧率从0.357mg/g·h增加到0.880mg/g·h,水温(X)与耗氧率(Y)的关系可用幂函数表示:Y=0.0045X1.5197。在水温29℃时,军曹鱼的耗氧率随着盐度的变化而变化。此外,军曹鱼的耗氧率表现出较明显的昼夜变化规律,在中午前和傍晚后较高。水温对军曹鱼幼鱼的窒息点有显著影响。水温从21℃升高到33℃,窒息点从0.74mg/L增加到1.44mg/L。盐度对窒息点的影响不显著。