丽江云杉体细胞胚胎发生

体细胞胚胎发生是细胞工程中植株再生的重要途径之一,可作为基因工程的受体系统,同时也是研究细胞全能性、细胞分化及其形态建成的理想试验体系.在应用上,体细胞胚胎发生是一种有效的大.规模无性繁殖方法(郭奕明等,2003;贾彩凤等,2006;Stasolla et al.,2003;Sutton,2002).在目前已成功诱导体胚形成的植物中,草本植物占了大多数.已有40多种木本植物获得了体细胞胚,尤其是用常规无性繁殖技术很难生根的针叶树的体胚发生研究取得了令人瞩目的进展,20多种不同的针叶树的外植体成功诱导出体细胞胚(施季森,2000).     

云南松合子胚发育及形态特征

为了掌握云南松合子胚发育规律,2006年和2007年5月下旬至8月下旬采集昆明树木园内的云南松幼嫩球果,对其合子胚进行解剖镜和光学显微镜观察拍照,进行形态观察和描述,据其形态特征将云南松合子胚划分为8个发育阶段.     

思茅松胚性愈伤组织的诱导

以思茅松成熟胚和不同发育时期的未成熟胚为外植体,在DCR、1/2LM和1/2P6培养基上分别添加不同种类及质量浓度组合的植物激素,进行胚性愈伤组织诱导试验.结果表明:一定激素质量浓度范围内的DCR和1/2LM培养基上,成熟胚可以诱导愈伤组织,但都为非胚性愈伤组织;思茅松不同发育时期的未成熟胚在含2,4-D 1.1 mg.L-1、BA 0.45 mg.L-1和KT 0.43 mg.L-1的1/2P6培养基上也可以诱导产生愈伤组织,但只有用处于顶端分生组织原基还不能明显可见时的未成熟胚为外植体进行诱导,才可以得到胚性愈伤组织,诱导率为1.8%;思茅松未成熟球果在普文林场思茅松种子园内最佳采样时期为7月下旬.     

针叶树种遗传转化研究进展与应用

尽管针叶树种的遗传转化相对较难, 但随着生物技术和分子生物学的快速发展, 近年来针叶树种的遗传转化研究取得了可喜的进展。文中从针叶树种主要采用的转化技术和遗传转化研究的应用2个方面对针叶树种遗传转化研究的情况进行了概括和总结, 并对该研究领域存在的问题和发展前景进行了探讨。     

思茅松成熟胚无菌萌发及农杆菌介导的遗传转化

以思茅松成熟胚为外植体,研究其适宜的萌发培养基,并对其根癌农杆菌介导的遗传转化进行初步研究。结果表明:适宜成熟胚萌发的培养基为1/2MS培养基;卡那霉素的质量浓度为40mg·L-1,抑菌剂羧苄青霉素的质量浓度为800mg·L-1;遗传转化的适宜条件为:菌液比色浓度的OD600为0.8,浸染时间15～30min,共培养时间1～2d;组织化学染色检测到了GUS瞬时表达。     

抗虫基因CryIA（b）植物表达载体的构建

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因具有对鳞翅目昆虫的毒杀作用,因此被广泛用于转基因研究,以提高植物的抗虫能力.故以含有CryIA(b)基因的PKUB质粒为模板,利用PCR技术克隆出抗虫基因[CryIA(b)],将其构建到PGEMT-Easy上,获得重组质粒PGEMT-CryIA(b),并测定全部序列,将PGEMT-CryIA(b)用BamHI 和SmaI酶切后插入表达载体PBI121的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成准备用于丽江云杉等针叶树种遗传转化CryIA(b)基因的植物表达载体PBI-CryIA(b),采用液氮冻融法将其转化到根癌农杆菌LBA4404和C58中,为下一步的转化工作奠定了基础.     

丽江云杉胚性愈伤组织石蜡制片中的整块染色与切片染色方法比较

以丽江云杉胚性愈伤组织为材料,运用整块染色方法与切片染色方法对其石蜡制片的效果进行比较。结果表明,两种染色方法制成的切片在观察效果上无明显差异,均能对丽江云杉的胚性愈伤组织的细胞核、淀粉粒染色,且各部分的着色均匀一致,染色效果佳。两相比较,整块染色法的操作步骤略为简化,能在一定程度上减轻切片污染、皱褶和蜡片脱落现象的产生。