植物抗病性信号传导调控基因的克隆与表达检测方法的研究

建立了从不同植物中克隆抗病性信号传导调控基因及检测其表达的方法，并优化了相关条件。用RT-PCR和PCR方法从拟南芥、烟草、番茄、中华鳖中克隆了7个信号传导通路中18个调控基因的cDNA和DNA序列，它们分别是：抗病基因Pto介导的蛋白激酶级联中的Pti4、Pti5和Pti6，细胞编程死亡通路中的Hinl和hsr203，水杨酸介导的系统性获得抗病性通路中的NPRI，乙烯信号通路中的ETRl、ERSl、CTRl、EIN2和ERFl，茉莉酸信号通路中的CO/1，核黄素信号通路中的RFBP和LR，脱落酸信号通路中的ABF3、ABF4和ABHI，以及调控不同信号通路的通调基因NDRl。进一步研究了这些基因表达的定量测定方法：用细菌激发子harpinE4处理植物，提取RNA作为cDNA第1链合成的模板，以在真核生物中广泛同源和高度保守的细胞伸长翻译因子基因EFlα为内参，用半定量RT-PCR法测定基因mRNA的积累，可以比较准确地检测不同基因的相对表达水平。     

大豆花叶病毒（SMV）侵染大豆种胚的研究

采用大豆、健株正反交和病、健株自交的方法，以间接ＥＬＩＳＡ检测其后代种胚的带毒率。试验结果表明：♀（Ｓ）×、♀（Ｓ）×♂（Ｈ）两组合子代的种胚毒率较高，在结荚初期均超过６０％；♀（Ｈ）×♂（Ｓ）子代种胚带毒率较低，仅２５％左右；在自交组组合中未检测到病毒。说明胚珠在发育早期受到病毒的侵染可能是种子带毒的主要因素，而带毒的花粉使种胚受到的病毒侵染的作用较小。对大豆花前期病、健株子房组织进行免疫胶体金     

受细菌诱导的植物启动子的克隆及其在转基因烟草中的活性

从烟草中克隆了受病原物诱导的植物启动子(pathogen-inducible plant promoters，PPPs)PPP1、PPP2、PPP3，其长度分别为1308，1170，220bp，序列分析表明它们均含有受细菌诱导的反应元件(Bac)。资料检索表明，PPP3可能是从植物分离的、受细菌诱导的最短的启动子。构建了包括每个PPP启动子和报道基因uidA(编码β-葡萄糖醛酸酶，GUS)的转化单元，用它们以及包括来自椰菜花叶病毒35S启动子和uidA单元，在相同条件下分别转化烟草，获得了分别含PPP和35S启动子的4类转基因烟草品系；分子检测表明，转化单元在转基因烟草染色体上能稳定整合。根据对转基因烟草GUS组织化学测定，3个启动子都可以受青枯菌的诱导。