梨灰霉病菌拮抗细菌Pseudomonas extremorientalis的鉴定、发酵条件优化及防效评价

灰霉病是梨贮藏期的主要病害，发病率高，为害严重。为了有效控制该病害发生，利用平皿稀释法从梨根际土壤中分离内生细菌，并采用琼脂平板扩散法进行抑菌活性初筛，筛选出1株拮抗细菌L21，基于形态特征、生理生化特性及16S rRNA和gyrB序列分析，鉴定为Pseudomonas extremorientalis。采用生长速率法测定菌株L21的无菌发酵液对12种病原真菌均有抑制作用，采用Salkowski比色法测定菌株L21能够分泌吲哚-3-乙酸（IAA），采用酪蛋白培养基平板检测菌株L21可以产生胞外蛋白酶。在单因素试验的基础上，通过Plackett-Burman试验设计筛选出pH、硫酸锰和转速3个影响发酵的重要因素，利用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验设计，获得菌株L21的最佳发酵条件为蔗糖20 g/L、牛肉膏20 g/L、硫酸锰3.00 g/L、甘油1 g/L、K₂HPO₄ 1.50 g/L、接种量8%、温度34℃、pH 7.31、转速200.66 r/min和培养时间15 h。处理96 h后，菌株L21对梨灰霉病的防效为74.23%，与多菌灵的防效差异不显著。本研究表明菌株L21具有广谱抑菌活性，为植物真菌病害的生物防治提供新的生防资源。