低温胁迫下佛手和枳乙烯应答因子6（ERF6）表达变化的比较分析

 以柑橘属寒敏感植物佛手‘青皮’品种叶片cDNA为模板,通过RT-PCR与RACE扩增,获得一个1 160 bp的乙烯应答因子（ethylene response factor,ERF）基因的cDNA序列,其基因编码区共999 bp,含有一个保守的AP2/EREBP结构域,与拟南芥AtERF6为同源基因,命名为CmsERF6（GenBank登录号为HQ698835）。4 ℃低温处理佛手和枳（柑橘属近缘种耐寒植物）植株,测定其寒胁迫生理指标（电解质渗出率、丙二醛含量）。使用实时荧光定量PCR,对佛手和枳叶中的ERF6表达含量进行测定分析,结果表明：低温对佛手与枳的ERF6表达均具有诱导作用,且表达量的变化趋势存在明显的差异。尤其在枳中,ERF6的表达较对照组上升约4 000倍,且电解质外渗率的变化与ERF6基因表达量变化具有一致性,说明ERF6基因参与低温胁迫应答。     

鲤科鱼类HIF-1的研究进展

低氧诱导因子1(Hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是动物低氧应答的关键转录因子。与哺乳动物相比,硬骨鱼类所处水环境的氧浓度波动范围更大。在鲤科鱼类中,热带鱼类斑马鱼是一种常见的模式动物,而鲫鱼是低氧耐受能力最强的淡水鱼类之一。介绍了HIF-1的结构以及氧依赖的降解途径,分析了低氧、温度和重金属对鲤科鱼类HIF-1及其靶基因表达水平的影响。     

金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达

[目的]克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础.[方法]提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体pET-32a上构建原核表达载体pET-32a-HSC70和pET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting检测分析表达获得的融合蛋白.[结果]金鱼HSC70基因CDS序列全长1950 bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996 bp,编码332个氨基酸.金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%.原核诱导表达获得的融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,其大小约91.5和55.0 kD,均能与Anti-Trx抗体发生特异性反应.[结论]HSC70和HSP40蛋白在鱼类及哺乳动物中高度保守,经原核诱导表达获得的金鱼融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,且携带有Trx标签,能与Anti-Trx抗体发生特异性反应,可作为互作蛋白用于RNA pull down试验.     

不同砧木对甜樱桃抗涝性影响

[目的]为筛选耐涝的甜樱桃嫁接砧木提供科学依据。[方法]以甜樱桃早大果为接穗,研究5种砧木（考特、本溪山樱、大青叶、尖嘴红樱和莱阳矮樱）嫁接苗的涝胁迫光合生理特性及抗性生理,利用隶属函数法对5种砧木甜樱桃抗涝性进行综合评价。[结果]随淹水胁迫时间延长,5种砧穗组合的甜樱桃幼苗光合速率、气孔导度、蒸腾速率、Fv/Fm逐渐下降,而胞间CO2浓度、初始荧光参数、H2O2、O2-和脯氨酸含量呈上升趋势。将13个指标经隶属函数分析发现5种甜樱桃砧木嫁接苗的抗涝性为考特〉本溪山樱〉大青叶〉尖嘴红樱〉莱阳矮樱。[结论]以考特为砧木的甜樱桃抗涝能力最强。     

鱼类瘦素受体研究进展

瘦素受体是一种跨膜受体,属于Ⅰ类细胞因子受体家族成员,广泛分布于动物机体的中枢及外周组织,在瘦素发挥生理调节功能的过程中起决定性作用.文章对鱼类瘦素受体的亚型分类、结构特点、信号通路、组织表达分布及其表达影响因素等研究现状进行综述,发现有关水温、pH和盐度等水体环境因子对鱼类瘦素受体表达水平影响的系统研究相对缺乏,因此今后应重点对比研究鱼类与哺乳动物间的瘦素受体生理学,揭示二者在结构特点和生理功能等方面的差异,并从进化角度探讨瘦素受体及其配体在演化过程中所扮演的角色;分析不同水体环境及鱼类各生长发育阶段中瘦素受体的基因表达调控模式,为水产养殖条件优化与品种选育等提供理论依据.     

佛手低温胁迫相关基因的差异表达

佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)是药用及观赏价值都很高的经济植物,但它对低温反应敏感,容易发生冻害现象.因此,了解其冷敏感机制对提高抗寒性起着重要的作用.以佛手为试材,-4℃低温处理24 h后,采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)和半定量RT-PCR技术,分析和鉴定与冷敏感相关的差异表达基因.DDRT结果获得差异片段121个,经生物信息学分析,差异表达序列中有33条为功能已知序列,88条为未知序列(其中5条具有开放性阅读框);半定量结果获得34个阳性基因片段,其中上调基因片段29个,下调基因片段5个.除了3个基因功能未知外,其余基因主要涉及植物防御/应激反应,细胞壁的修饰,信号转导,代谢,氨基酸转运,氧化损伤,转录和蛋白质的合成,其中与植物防御/应激反应和光合作用有关的基因可能是造成佛手寒敏感的主要原因.