苹果果肉总蛋白提取及双向电泳分析

以苹果果肉为试材,通过比较总蛋白不同提取方法 (TCA-丙酮沉淀法、匀浆法以及改良酚抽提法),建立适于苹果果肉总蛋白提取技术。从所得双向电泳图谱分离效果来看,改良酚抽提法所得蛋白点个数最多、图谱背景清晰,分离效果好,明显优于TCA-丙酮沉淀法和匀浆法。同时,通过对各图谱分离效果的综合比较,认为在现有研究条件下,苹果果肉总蛋白双向电泳分析的理想上样量为250μg。     

苹果果实表皮总蛋白提取及双向电泳方法的优化

以苹果果实表皮为试材,采用3种方法提取果实表皮总蛋白,并对双向电泳(2-DE)操作体系进行优化。结果表明:改良酚提法适于苹果果实表皮总蛋白的提取,优化后的2-DE分离体系为预制IPG胶条18cm pH 4~7,上样量600μg,改进后的等电聚焦程序,浓度16%的分离胶,适于苹果果实表皮总蛋白的2-DE分离。     

苹果新种质B96-1的选育及其抗性评价初报

苹果新种质B96-1是我们于1996年以金冠作母本、富士花药培养纯系富85-1作父本杂交育成。果实圆柱形,平均单果重200.0g,果皮黄绿色,阳面带红晕,无果锈;果肉黄白色,肉质松脆,汁液多,风味酸甜适度,品质上等;可溶性固形物含量14.60%,果肉硬度7.03kg/cm2;果实贮至翌年3—4月,不皱皮;抗寒、高抗苹果早期落叶病和苹果果实轮纹病。     

苹果实时荧光定量PCR分析中内参基因的筛选

【目的】为筛选苹果实时荧光定量PCR实验中最适内参基因,【方法】应用实时荧光定量PCR技术,分析5个传统内参基因18SrRNA、ACTB、GAPDH、UBQ、TUB在苹果不同基因型、不同组织、果实不同发育时期的mRNA表达差异情况。供试的6个不同基因型苹果分别为:新疆野生苹果、八棱海棠、丽江山荆子、‘津轻’、‘国庆’、‘金冠’;6种不同组织为果皮、果肉、叶片、愈伤组织、花瓣、种子;5个果实发育不同时期为花后28、50、74、95、115 d。【结果】经geNorm程序分析发现5种内参基因的表达稳定性各异,UBQ在果实不同基因型和不同发育时期的基因表达分析中最稳定;ACTB和UBQ在6种不同组织中表达均稳定。【结论】UBQ在参试样品中表达均比较稳定,是研究苹果基因表达分析中理想的内参基因。     

苹果叶片总蛋白提取及其双向电泳分析

蛋白质提取方法和电泳条件的建立是蛋白质组学研究中双向电泳分析的关键。通过比较不同提取方法,包括酚/SDS抽提、TCA-丙酮沉淀法、甲醇/醋酸铵沉淀法以及改良HB-酚抽提方法。此外,还优化了样品上样量、等电聚焦程序设置等条件。从所得2-D图谱分离效果来看,改良HB-酚抽提方法所得蛋白点数最多,2-D图谱背景清晰、分离效果好,明显优于其他3种方法。300μg上样量可作为苹果叶片总蛋白2-DE分析的理想的上样量,同时优化了等电聚焦程序,最终得到的2-D图谱分离效果较为理想。该研究的开展也为苹果叶片蛋白质组学后续研究奠定了基础。     

苹果LIM基因家族生物信息学及表达分析

【目的】在苹果全基因组中鉴定LIM,通过分析启动子作用元件、保守结构域、基因聚类、基因结构、染色体定位以及组织表达模式,为研究和利用苹果LIM奠定基础。【方法】利用苹果基因组数据库GDR和PLAZA,获得苹果LIM家族成员并进行编号。苹果LIM蛋白氨基酸序列的基本信息通过ExPASy Proteomics Server进行预测,利用Cell-PLoc进行亚细胞定位预测,利用CD-Search Tool进行LIM结构域分析,采用MEGA 7软件构建进化树,采用GSDS绘制基因结构,并利用TBtools软件对鉴定得到的MdLIM进行染色体定位,通过实时荧光定量RT-PCR对MdLIM的组织表达进行分析,并利用SPSS 18.0软件分析差异显著性。【结果】共鉴定得到11个苹果LIM家族成员,这些MdLIM蛋白包含96—222个不等的氨基酸残基,等电点分布在6.14—9.01。亚细胞定位结果显示,MdLIM蛋白在细胞核中均有分布。启动子作用元件分析表明,11个MdLIM启动子上分布有响应激素、环境适应性和逆境诱导的元件。蛋白保守结构域分析表明,11个MdLIM蛋白中除MdLIM8具有单LIM结构域外,其余10个均具有双LIM结构域。根据聚类分析结果可将MdLIM分为4组。染色体定位结果显示,MdLIM分布在苹果17条染色体中的7条,且MdLIM在7条染色体上的分布不均匀。花、叶、果皮和茎中的实时荧光定量RT-PCR结果显示,4个组织中均能检测到MdLIM的表达,且表达量具有一定差异。【结论】苹果LIM基因家族包括11个成员,进化上可分为4组,11个基因分布于7条染色体上,在不同组织中的表达具有多样性和特异性。     

晚熟苹果新品种‘华蜜’

苹果新品种‘华蜜’是以‘金冠’作母本，‘华富’作父本，杂交选育而成。果实圆锥形，果形指数1.1，平均单果质量220 g；果皮鲜红色，底色黄绿色，果面较光滑，果点中大；果肉较细，淡黄色，肉质松脆多汁，去皮硬度7.5 kg • cm-2，可溶性固形物含量17.5%，口感香甜，有香味，品质上等。果实生育期168 d左右，属晚熟品种，在辽宁省兴城地区10月下旬成熟，产量32 t • hm-2。     

苹果属植物寄主应答病原菌胁迫的蛋白质组学研究进展

苹果基因组研究的不断深入,为苹果属植物蛋白质组学研究奠定了基础。近年来,蛋白质组学分析方法在探讨苹果属植物应答病原菌胁迫时,所启动的抗病相关蛋白的差异表达,以及相关抗病机制方面发挥了重要作用。本文针对近年来蛋白质组学研究技术在果树上的应用,综述了苹果属植物应答火疫病、褐斑病、黑星病等主要病害胁迫的蛋白质组学研究进展,分析了蛋白质组学分析技术在苹果属植物相关研究中存在的问题,以期为进一步探究苹果属植物抗病的分子机制提供参考。     

中晚熟苹果新品种‘华苹’

‘华苹’是以‘金冠’与‘惠’杂交育成的优良中晚熟苹果新品种。平均单果质量177 g。果实长圆形,果皮鲜红色,果面光洁,外观美丽,果肉黄白色,肉质松脆,汁液多,风味酸甜、微香,品质好。果实硬度7.1 kg · cm^-2,可溶性固形物含量12.84%,可溶性糖9.60%,可滴定酸0.64%,维生素C 0.056 mg · g^-1。在辽宁省辽西地区4月上中旬萌芽,5月上旬开花,9月下旬果实成熟,果实发育期140 d左右。较抗寒和抗枝干轮纹病,适宜在‘金冠’种植区发展。     

黄色苹果新品种‘华月’

‘华月’苹果是以‘金冠’为母本,‘华富’为父本杂交育成的新品种。果实圆柱形,平均单果质量230g;果皮黄色,阳面带红晕;果肉肉质,似‘富士’风味。晚熟,抗寒,高抗苹果早期落叶病、果实轮纹病。