美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析

美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647)。该基因开放阅读框为3 000 bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp₃₄～Asp_( 527)和Leu₅₆₃～Gln₉₂₅的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu₅₆₃～Gln₉₂₅之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。     

两种杀菌剂与胶质芽孢杆菌对番茄发芽及生长的影响

为明确杀菌剂甲霜灵和恶霉灵与胶质类芽孢杆菌对番茄种子发芽及幼苗生长的影响,通过平板对峙试验、种子发芽试验、穴盘试验研究了3种材料对番茄种子发芽及幼苗生长的影响效果。结果表明:甲霜灵和恶霉灵对胶质芽孢杆菌生长无不良影响;胶质芽孢杆菌浓度为1.63×105 cfu·mL~(-1)时,处理番茄种子发芽率为75.2%,高于对照7.14%;当甲霜灵药液浓度为100.0、50.0、25.0、12.5mg·mL~(-1)时对番茄种子发芽率均有促进作用,浓度为100mg·mL~(-1)时发芽率最高为62.5%;恶霉灵在推荐浓度下对番茄种子发芽率有抑制作用;胶质芽孢杆菌、甲霜灵+恶霉灵、胶质芽孢杆菌+甲霜灵+恶霉灵混合液处理番茄幼苗根长分别高于对照3.88%、4.87%、11.56%,株高分别高于对照1.27%、3.80%、7.13%,地上部干质量分别是对照的2.3、1.3、3.5倍。说明胶质芽孢杆菌、甲霜灵对番茄种子发芽势具有促进作用,胶质芽孢杆菌、甲霜灵与恶霉灵3种混用对番茄根的发育有抑制作用。