青天葵独脚金内酯信号转导关键基因D14的克隆与亚细胞定位分析

D14基因是独脚金内酯信号转导途径的关键基因,其编码的蛋白能够使SLs释放出活性小分子物质而发挥调节腋芽起始的功能。本研究根据其他物种的D14基因从青天葵转录组数据中筛选获得2条高度同源的片段,命名为NfD14a和NfD14b。应用RT-PCR和RACE技术,克隆获得NfD14a和NfD14b的cDNA全长序列,GenBank登录号分别为MH028026、MH028027。NfD14a基因全长1206 bp,ORF为861 bp,编码286个氨基酸;NfD14b基因全长1082 bp,ORF为813 bp,编码270个氨基酸。对NfD14的编码蛋白序列进行了生物信息学分析,结果表明：NfD14a和NfD14b均属于α/β折叠蛋白水解酶超家族成员（Abhydrolase superfamily）,但系统进化分析结果表明两者同源性不高。利用一步快速克隆的方法构建了植物表达载体35S::NfD14a-EGFP和35S::NfD14b-EGFP,并分别获得其工程菌。瞬时表达结果表明,NfD14a和NfD14b均定位在烟草原生质体的细胞核和细胞质。本研究通过对NfD14基因全长cDNA序列的克隆与亚细胞定位分析,为青天葵独脚金内酯信号转导途径调控植物分枝生长发育机制的研究奠定基础。     

岗梅发芽抑制物质初步研究

以白菜种子为试材,以新鲜岗梅果实不同部位(种子、果肉、果皮)为研究对象,采用系统溶剂提取的方法,提取不同极性提取物后稀释成不同浓度(0.100、0.067、0.033、0.017 g·m L-1)处理白菜种子并进行发芽试验,研究了不同提取物对白菜种子发芽及发芽后胚根长的影响,以期确定岗梅果实发芽抑制物存在的类型和存在部位。结果表明:岗梅果实3个部位中均含有内源性发芽抑制物。种子部位石油醚浸提物、水浸提物能显著抑制白菜种子的萌发;果肉部位石油醚浸提物、甲醇浸提物显著降低了白菜种子的发芽率,而乙酸乙酯浸提物则显著降低了白菜种子的胚根长;果皮部位乙酸乙酯、甲醇、水浸提物能显著抑制白菜种子的萌发,而石油醚浸提物、甲醇浸提物、水浸提物显著降低了白菜种子的胚根长。     

穿心莲MSAP反应体系的优化及引物筛选

为建立穿心莲甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitivity amplification polymorphism,MSAP)反应体系,本研究以穿心莲叶片为材料,提取总基因组DNA,采用L25(55)正交试验对穿心莲MSAP的预扩增和选择性扩增的相关参数进行了优化,并对MSAP引物进行了筛选,以期建立穿心莲MSAP最佳反应体系。优化后的体系具有稳定的图谱,清晰丰富的条带。运用优化后的体系,在穿心莲MSAP的80对引物中筛选出8对有效引物。筛选出的引物组合特异性良好,能够用于后续穿心莲甲基化的相关研究。为其他药用植物MSAP分析提供参考。