产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）,通过培养性状观察和小鼠接种试验,证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析,ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％,ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％,其相对分子质量约３７５００;经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明,以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护,以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护,从而说明表达产物具有良好的免疫原性。     

抗伊氏锥虫表膜单克隆抗体的研究 Ⅱ.用抗伊氏锥虫表膜抗原McAb检测循环抗原

利用抗伊氏锥虫表膜抗原的McAb双抗体夹心法,检测了48匹健康马(骡)、5匹人工接种伊氏锥虫马(骡),9匹先用锥虫弱毒株免疫后用强毒株攻毒马(骡)共278份血清的循环抗原(CA),同时用常规间接ELISA检测了相应的循环抗体(CAb)。结果: 278份血清的CA、CAb阳性率无显著差异,但其阳性检出时机不完全吻合;人工接种马(骡)的CA阳性检出率高于CAb,于接虫后经1-2个CA高峰而死,濒死前4/5动物的CA呈现阳性,免疫马(骡)在攻虫前CA即可呈现阳性,多经1-3个CA高峰后逐渐转阴;人工接种马(骡)的CA水玉高于免疫马(骡),二次攻虫后的CA水平高于首次。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与中和效应

用提取的 Ａ 型产气荚膜梭菌 α毒素包涵体免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠后， 取小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 骨髓瘤细胞进行融合和克隆化，经间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 筛选，共获得 １ Ａ８、１ Ｃ３、１ Ｄ５、１ Ｄ８、１ Ｆ１、１ Ｈ１ 和 ２ Ｅ３ ７ 株稳定分泌单克隆抗体（ Ｍ ｃ Ａｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，７ 株 Ｍ ｃ Ａｂ 的 Ｉｇ 亚类有 Ｉｇ Ｇ１（１ Ｄ８）、 Ｉｇ Ｇ３（１ Ａ８、１ Ｃ３ 和 ２ Ｅ３）和 Ｉｇ Ｍ（１ Ｄ５、１ Ｆ１ 和 １ Ｈ１）。细胞培养上清和腹水抗体效价分别为 １∶５１２～１∶１ ０２４ 和 １∶１０６ ～１∶１０８ 。尤为重要的是，２ Ｅ３ 杂交瘤细胞株分泌的 Ｍ ｃ Ａｂ 不仅能够中和 α毒素的磷脂酶 Ｃ活性和溶血活性，而且能够对致死性腹腔感染小鼠产生良好的被动保护作用。     

产肠毒素性大肠杆菌耐热性肠毒素基因探针的制备及初步应用

产肠毒素性大肠杆菌重组菌PSLM004质粒经IaqI酶切,其840bp的片段用~(82)P-dATP标记后作为STI基因探针。菌落原位杂交表明,该探针可以和人源、猪源产STI的ETEC有阳性杂交反应,而不与不产STI的载体菌株pBR322、非致病性E.coli和其它肠道杆菌有杂交反应。用该探针对35株已知血清型的E.coli、65株从人腹泻分离的E.coli.和7株猪腹泻E.coli进行STI基因检测,分别有6株、7株和2株STI探针菌落杂交阳性,阳性率分别为17％(6╱35)、11％(7╱65)和28％(2/7)。乳鼠生物学试验比较研究表明,70％(11/16)的STI探针栓测阳性菌株其乳鼠生物学试验也为阳性。用该探针可以对产STI的ETEC进行临床检测和流行病学调查。     

间接血凝试验在马鼻疽诊断上的应用

从76年开始,应用间接血凝试验进行马鼻疽诊断的研究。采用鞣酸法将鼻疽抗原吸附在醛化血球上,先后对健康马、马来因马、鼻疽马(包括开放性鼻疽马和马来因点眼与补反均呈阳性的马)及人工感染马等762份血清中相应的抗体进行了检测,并与补体结合反应作了比较,现将结果报告如下。     

用单克隆抗体对鼻疽杆菌和类鼻疽杆菌表面抗原的免疫印迹分析

对鼻疽杆菌M27株与类鼻疽杆菌H4、H103、H146、H152株超声波粉碎后的可溶性抗原作了SDS—PAGE和免疫印迹分析.结果表明,鼻疽杆菌和类鼻疽杆菌特异性MCAb 2D_4与所有实验菌株都有反应,在M27、H4、H103、H146、H152中都有1条分子量为107000的抗原蛋白带,为鼻疽杆菌和类鼻疽杆菌共同抗原带;而类鼻疽杆菌特异性McAb 3A_1只与类鼻疽杆菌H4、H103、H146、H152,分子量为28000的类鼻疽杆菌特异抗原带起反应,不与鼻疽杆菌的抗原带反应.尽管SDS—PAGE中显示M27与H4有多条分子量相同条带,但缺少3A_1对应的特异蛋白带.     

免疫荧光间接染色法与酶联免疫吸附试验、补体结合试验对马鼻疽诊断的比较

马鼻疽的血清学诊断,过去一直采用补体结合试验(cF)。近几年来,我们又相继建立了微量间接血凝试验、乳胶凝集试验、免疫荧光间接染色法(IFA)及酶联免疫吸附试验(ELISA)等比较敏感的检测方法。为了比较IFA、ELISA、cF三种方法对鼻疽马检测的敏感性,我们对31匹鼻疽马及10匹经病理学确诊的鼻疽马进行了检测,现将结果报道如下。     

应用金黄色葡萄球菌检测马B淋巴细胞膜表面IgG阳性细胞的研究

本试验建立了应用含有A蛋白的金黄色葡萄球菌(SPA菌体)、吖啶橙染色液,轻便荧光显微镜,检测马外周血中B淋巴细胞膜表面IgG阳性(SmIgG~+)细胞的简便方法。检测结果:健康马SmIgG~+细胞平均直为10.29±1.75;驴为10.08±3.72;马来因马为10.87±1.3;鼻疽马为13.82±4.78。健康马、驴、马来因马三者SmIgG~+的细胞数无显著差异,鼻疽马与健康马、马来因马的却有显著差异,表明本法对鼻疽有一定诊断价值,还可用以检测鼻疽的免疫功能。     

抗鼻疽菌单克隆抗体的应用研究Ⅰ.免疫荧光间接法对鼻疽菌的检测

应用抗鼻疽菌单克隆抗体(McAb)作荧光抗体间接染色法代替习用的诊断血清检测鼻疽菌,证明McAb对鼻疽菌检测的敏感性高,特异性较强。     

ELISA检测抗鼻疽菌核糖体单克隆抗体杂交瘤细胞的研究

通过对ELISA的抗原最适浓度、抗原包被时间,被检物和酶结合物的感作时间等因素的测定,建立了检测抗鼻疽菌核糖体单克隆抗体杂交瘤细胞的方法。先后对两次细胞融合所产生的124孔杂交瘤细胞进行了检测,有69孔为阳性。对一些阳性孔进行克隆化培养,筛选出一株较稳定的分泌高效价抗体的细胞株。对此细胞株五次克隆所产生的233个克隆孔检测,均为阳性。由此证明,建立的方法快速、敏感、特异性和重复性好,适于杂交瘤细胞的筛选。