表达H5N1亚型禽流感HA、NA、 M1基因的重组杆状病毒的鉴定

为证实插入了禽流感HA、NA、M1、M2、NP基因的重组杆状病毒的表达物为具有禽流感形态的病毒样颗粒,对表达产物进行电镜、Western Blot、ELISA检测。蔗糖密度梯度离心纯化表达产物,电镜观察,可见禽流感病毒样颗粒;以Western Blot方法用HA、NA、M1抗体检测表达产物和纯化产物,可见特异性条带;NA多抗为捕获抗体、HA单抗为检测抗体建立夹心ELISA方法,检测表达产物,结果为阳性。结果显示,插入了禽流感HA、NA、M1、M2、NP的重组杆状病毒能够表达禽流感病毒样颗粒。     

不同培养条件对绵羊卵母细胞体外成熟和凋亡的影响

目的,探讨不同温度和不同培养时间对绵羊卵母细胞体外培养,成熟和凋亡的影响,选择合适的温度和培养时间为绵羊卵母细胞进行体外成熟提供技术支持。方法:在绵羊死亡30 min之内取出卵巢4~6 h带回实验室,切割法收集卵母细胞。在5%CO_2、饱和湿度等条件相同情况下,分别在36.0℃、37.0℃、37.5℃、38.0℃、38.5℃、39℃下培养24~26 h。实验中获得的结果数据,采用t检验方法进行差异显著性分析。结果:26 h的成熟率高于其他4个时间的成熟率,在培养22 h到26 h过程中,随着培养时间的增加,卵母细胞的成熟率呈增高。但是在26 h过后,随着培养时间增加,卵母细胞的成熟率呈递减趋势,至30 h卵母细胞的成熟率明显低于22 h的成熟率。38.5℃时卵母细胞的成熟率最高,36℃是卵母细胞的凋亡率最高。卵母细胞成熟率的整体趋势是随着温度的上升呈正相关。