血清4型禽腺病毒W株的分离鉴定和全基因组序列分析

为了解血清4型禽腺病毒（fowl adenovirus genotype 4,FAdV-4） W株全基因序列、结构特征及遗传变异情况,本试验采集发病鸡肝脏和肾脏进行PCR鉴定、SPF鸡胚和鸡胚肝细胞分离、电镜观察证明该病毒为FAdV-4,TCID₅₀为10^-7.2/0.1 mL;电镜观察可见70 nm左右的二十面体无囊膜病毒颗粒;经绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚后能明显抑制鸡胚发育出现侏儒胚,接种10 d内死亡率达100%;进一步对W株进行全基因组扩增及序列分析。病毒序列分析结果显示,其全基因组长为43 591 bp,共有60个开放阅读框,W株与GenBank中公布的FAdV-4参考毒株全基因组核苷酸序列同源性为98.4%~100%,其中与标准株非致病性毒株ON1（登录号：GU188428.1）的同源性为98.4%,主要缺失ORF19（脂肪酶基因）和ORF27;通过对病毒主要结构蛋白Hexon、Fiber-1和Fiber-2基因分析发现,W株与近几年国内分离株亲缘关系较近,与ON1株及其他国外分离株差异较大。综上说明,该分离株具有高致病性,与国外分离株存在较大差异,为进一步分析FAdV-4的毒力增强机制提供了基础依据。     

1株Ⅰ群血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病性

用实验室保存的1株血清4型禽腺病毒(FAdV-4)W株对雏鸡(1dSPF鸡)进行攻毒试验,研究其致病性及免疫原性,每日观察鸡只精神状态,持续14d,计算死亡率,对每组死亡鸡只立即剖检,记录眼观组织病变,并将肝脏固定于10%的福尔马林中用于组织学观察。SPF鸡攻毒试验结果表明,口服接种100TCID50病毒量对1dSPF鸡的致死率高达100%,死亡时间在144~150h之间;对死亡鸡只剖检均可见到明显的心包积液,肝脏出血坏死;肝组织切片HE染色可见典型的嗜碱性核内包涵体。用该病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫保护作用,制作的高免血清也具有良好的治疗效果。     

禽腺病毒W株Hexon基因的分子特征及其致鸡胚侏儒化研究

从河南焦作某发生心包积液和肝肿大为病变特征的病鸡群采集肝脏组织,经分离、纯化、PCR鉴定和测序分析,确定病原为I群C种血清4型禽腺病毒(FAdV-4),命名为W株。该W株的ELD_(50)为10~(-3.576)/0.2 mL,Hexon基因全长2 814 bp,A、T、G、C碱基数和含量分别为654个(23.24%),514个(18.27%),679个(24.13%)和967个(34.36%)。Hexon基因编码蛋白的分子量为106.7 ku,共含有937个氨基酸,其中疏水氨基酸439个(46.80%),中性氨基酸265个(28.25%),亲水氨基酸233个(24.84%)。W株Hexon基因推导的氨基酸序列与FAdV-4 JSJ13株相比,在第181、939位2个氨基酸位点存在缺失;与FAdV-4 PK-01株相比,在第194、371、376位3个氨基酸位点存在突变;与FAdV-4 ON1株相比,有25个氨基酸位点存在突变。将W株经绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚,与未接种病毒的对照组相比,接种W株病毒组在接种后第3天EE值均呈现显著性差异(P<0.05),第6天呈现极显著性差异(P<0.01),从而确定EE值和EE指数可以作为反映FAdV-4对鸡胚致侏儒作用的重要指标。     

不同途径感染4型禽腺病毒对SPF鸡的致病性研究

为了探讨不同途径感染4型禽腺病毒(FAdV-4)对SPF鸡的致病性,试验将60只21日龄SPF鸡随机分为A～F组,10只/组,A～E组分别经静脉注射、胸肌注射、滴鼻、皮下注射、口服(肠溶性胶囊)等不同途径感染含5×10~4 TCID_(50)的FAdV-4;F组为对照组,不接种FAdV-4。攻毒24 h和48 h后检测泄殖腔排毒情况,每天统计发病率和死亡率,并监测鸡只体温和体重。结果表明:解剖各攻毒组死亡鸡只均可见肝脏肿大且有明显出血点,颜色褪至淡褐色或黄色;心包膜增厚,内有大量黄色澄亮液体。泄殖腔排毒检测显示A组在注射病毒48小时时最先开始排毒。攻毒后168小时时A～E组发病率分别为100%、100%、50%、80%、20%。攻毒后A～E组死亡率分别为90%、80%、50%、80%、20%。攻毒后24小时时,各攻毒组SPF鸡体温和体重差异均不显著(P0.05);攻毒后48小时时,A组、B组体温升高,与F组比较差异显著(P0.05);攻毒后72小时时,A组、B组SPF鸡体重与F组比较显著下降(P0.05),体温与F组比较显著升高(P0.05);攻毒后96小时时,B组、D组、E组SPF鸡体重与F组比较差异显著(P0.05);攻毒后120小时时,C组、D组、E组SPF鸡体重与F组比较差异显著(P0.05);攻毒后168小时时,E组SPF鸡体重与F组比较差异显著(P0.05);攻毒后264小时时,C组SPF鸡体重与E组比较差异显著(P0.05)。说明静脉注射途径对鸡只的致病性最大,其次为肌肉注射。     

血清4型禽腺病毒W株的分离鉴定和全基因组序列分析

为了解血清4型禽腺病毒(fowl adenovirus genotype 4,FAdV-4)W株全基因序列、结构特征及遗传变异情况,本试验采集发病鸡肝脏和肾脏进行PCR鉴定、SPF鸡胚和鸡胚肝细胞分离、电镜观察证明该病毒为FAdV-4,TCID_(50)为10~(-7.2)/0.1 mL;电镜观察可见70 nm左右的二十面体无囊膜病毒颗粒;经绒毛尿囊膜途径接种10日龄SPF鸡胚后能明显抑制鸡胚发育出现侏儒胚,接种10 d内死亡率达100%;进一步对W株进行全基因组扩增及序列分析。病毒序列分析结果显示,其全基因组长为43 591 bp,共有60个开放阅读框,W株与GenBank中公布的FAdV-4参考毒株全基因组核苷酸序列同源性为98.4%～100%,其中与标准株非致病性毒株ON1(登录号:GU188428.1)的同源性为98.4%,主要缺失ORF19(脂肪酶基因)和ORF27;通过对病毒主要结构蛋白Hexon、Fiber-1和Fiber-2基因分析发现,W株与近几年国内分离株亲缘关系较近,与ON1株及其他国外分离株差异较大。综上说明,该分离株具有高致病性,与国外分离株存在较大差异,为进一步分析FAdV-4的毒力增强机制提供了基础依据。     

河南固始县布病防疫社会化服务的探索与实践

本文总结了河南省固始县布病防疫政府购买服务的实践经验,并提出提高服务能力、加强属地管理、加强政府监督和扩大购买服务范围等建议,充分发挥社会化服务在兽医领域的巨大作用,促进动物防疫体制改革。