成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存

在含10％小牛血清（NBS）的DMEM培养基中，分别各添加5％，10％，15％，20％和25％的二甲基亚砜（DMSO）,丙二醇（PG），乙二醇（EG）和甘油（G），对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存；复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示，5％－25％DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86．5％，86．3％，65．3％，36．0％及31．4％。其中各抗冻剂5％和10％组的细胞复苏率最高，与15％组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO，PG，EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4．8％，6．1％，6．7％，6．8％。结果表明，采用慢速冷冻时，DMSO，PG，EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂，最佳使用含量均为5％－10％。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5％－10％的DMSO，PG，EG和G的DMEM（含10％NBS）冻存液中，2步慢速降温，液氮储存，37℃水浴复苏，是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。     

鸡马立克氏病肿瘤组织细胞端粒长度的测定

用马立克氏病病毒 ( MDV)京 -1株血毒对 SPF鸡攻毒 ,7周后扑杀 ,采取各内脏组织 ,一部分组织做病理切片 ,发现有肿瘤细胞浸润者即判定为阳性 ;另一部分组织用于端粒长度测定。以 DIG标记的探针( TTAGGG) 4,通过 Southern Blot方法测定细胞端粒长度 ,结果表明 ,阳性肾脏、肝脏、脾脏、神经、卵巢等组织细胞端粒长度较正常组织细胞的明显缩短     

基因疗法在兽医治疗学中应用的前景

基因疗法在兽医治疗学中应用的前景阮承迈，杨永胜（解放军农牧大学长春１３００６２）基因疗法是指利用一功能性基因片段来补偿机体缺失的基因。更广义地说是指把基因疗法看成是在体内插入一外源性基因来产生具有治疗作用的蛋白质。后者包含基因疗法不仅能用于治疗先天性...     

鸡组织细胞端粒相关序列的克隆及序列分析

根据真核细胞端粒DNA序列的共同特点，设计了一条引物（TELO02）（24nt)。按照TaKala克隆试剂盒的介绍方法，染色体基因组DNA经HaeⅢ和HinfⅠ两种限制性内切酶酶切后，先进行初级PCR（C1和TELO02）扩增，得到的产物为模板再经过次级PCR（C2和TELO2）扩增，得到的产物用试剂盒回收，并连接到PMD-18-T载体上，转化到JM109受体菌中，从阳性克隆中提取质粒DNA进行PCR和酶切鉴定，确认后进行序列测定，获得了一段243sbp的鸡端粒相关序列。此序列与人第7条染色体基因组末端序列的同源性为63.5%；与鼠端粒旁序列同源性为63.2%；而与MDV基因组序列的BamHⅠ酶切片段76.6%的同源。     

盐胁迫下短芒大麦cDNA文库的构建

为了克隆与研究盐胁迫相关的基因,以盐胁迫后的短芒大麦叶片为材料,用Trizol一步法提取总RNA。Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA。反转录合成第一链cDNA和第二链cDNA。cDNA纯化后,与λZAP表达载体连接,体外包装后得到盐胁迫下短芒大麦cDNA文库,其重组率达96％,滴度为2×10~7pfu/mL,插入片段长度0.5～3.0kb。     

端粒酶活性检测方法的改进及dNTP浓度对端粒酶活性的影响

利用重新设计的引物和反应步骤 ,对检测端粒酶活性的 TRAP反应进行了改进。与原有方法相比 ,新方法在PCR扩增过程中不改变端粒酶产物的长度和比例 ,能更准确地反映端粒酶反应产物的性质。利用这个方法 ,考察了d NTP浓度对端粒酶的影响 ,发现不同的脱氧核苷酸对端粒酶活性的影响有差异。     

增茸灵对中枢神经系统作用的实验研究

增茸灵对中枢神经系统作用的实验研究阮承迈邓旭明宋鲁敏郭金荣程远国张金子（解放军农牧大学药理教研室·长春·１３００６２）在雄鹿发情过程中，常因相互斗殴而致损伤，甚至引起死亡。据临床使用时观察，增茸灵对雄鹿有显著的镇静、减少斗殴次数的作用，为此，本文从中...     

体外培养小鼠生殖细胞的碱性磷酸酶活性研究

研究小鼠生殖细胞体外培养时碱性磷酸酶 (AP)活性表达 ,为鉴别精原细胞提供依据。分别培养 2日龄 ,6日龄 ,12日龄仔鼠及成年鼠生精上皮细胞 2 4～ 4 8h,进行 Gomori- Takamat-su组化染色 ,观察各类细胞形态及染色特性。结果表明 ,体外培养 2 4～ 4 8h,管周细胞为铺展面积较大的不规则形状 ,细胞表达 AP活性。支持细胞 (Sertoli cell)为不规则形状 ,不表达 AP活性。生殖细胞均为圆球形。性原细胞和精原细胞均表达 AP活性 ,部分精母细胞也表达 AP活性。 AP活性表达可作为检测培养体系中小鼠精原细胞的一个辅助指标