家蚕山梨醇脱氢酶基因的转录水平特性分析

为了探究家蚕山梨醇脱氢酶基因（BmSDH）在家蚕各发育时期和组织的转录水平,根据家蚕二化性品种子代滞育性受亲代胚胎期催青条件调控的原理,利用半定量RT-PCR分析25.0℃常温明催青和17.5℃低温暗催青对家蚕品种“秋丰”各发育时期蚕体和组织中BmSDH转录水平的影响.结果显示,BmSDH-1、BmSDH-2a和BmS-DH-2b在家蚕的各个发育阶段均有表达：在幼虫期5龄3d,BmSDH-1在常温明催青组脂肪体中转录水平较高;BmSDH-2a和BmSDH-2b在常温明催青条件下的血液、脂肪体和卵巢中转录水平均高于低温暗催青;在蛹期3d,BmSDH-2a和BmSDH-2b在常温明催青条件下血液和卵巢中的转录水平均低于低温暗催青;在次代卵产下后6～24h期间,BmSDH-2a和BmSDH-2b的转录水平逐渐升高.因此,BmSDH-1和蚕卵滞育与否没有直接关系,而BmSDH-2a和BmSDH-2b与家蚕二化性品种卵滞育与否有重要的平行关系,为从分子水平阐明家蚕滞育的分子机制积累了试验数据.     

家蚕丝素蛋白轻链基因(Fib-L)cDNA及启动子的克隆与分析

为了利用家蚕丝素蛋白轻链基因(Fib-L)及启动子元件开展转基因研究,克隆了家蚕品种797的Fib-L cDNA及启动子,并比较了6种不同品种来源的Fib-L基因的cDNA序列。结果表明,轻链基因cDNA长为786 nt,编码了包括由18个氨基酸组成的信号肽在内的共262个氨基酸的蛋白质前体;启动子序列分析显示其包括典型的TATA盒和类CAAT盒序列以及丝腺特异性结合位点等。用Fib-L启动子控制报告基因Egfp,进行家蚕BmN细胞内的瞬时表达研究,结果表明,Fib-L启动子驱动的Egfp报告基因可以在BmN细胞瞬时表达。     

家蚕新品种陕蚕六号原种及杂交种性状简介

陕蚕六号即125M·锦6B×241·绫4,是中·中×日·日杂交型式的双交四元一代杂交种。 中系亲本之一125M是20世纪80年代末通过杂交、回交、定向选择等方法,按照成对选育理论选育成功的多丝量基础品种,其母本是高出丝率基础品种125,父本是茧丝长长、丝质优的84M,经过7年多杂交、系统选育而成,其茧丝长长、净度优、解舒率高。     

对我所10个家蚕高茧层率基础品种的茧质稳定性分析

采用Eberthart的品种稳定性分析方法,对我所选育的10个高茧层率基础品种进行了全茧量,茧层量,茧层率的稳定性分析,结果表明茧质性状的遗传稳定性受环境的影响最大,而受品种及品种与环境互作间的影响相对较小.品种124,125,141综合性状稳定,作为蚕育种的基础材料有一定的利用价值.     

家蚕新品种春·花×秋·月原种及杂交种性状简介

春·花×秋·月(鉴定代号：9703×9704)是西北农林科技大学蚕桑丝绸研究所选育成功的高产、优质、强健好养的春用多丝量家蚕新品种。 1 原种性状 1.1 春*花(9703) 中国系统二化性四眠杂交原种。春为125与84M杂交选育而成，具有茧丝长、茧质优等特点。花为引进品种，具有茧形大、强健好养等特点。越年卵为灰绿色，卵壳淡黄间有黄色。蚁蚕黑褐色，孵化齐一。稚蚕趋光、趋密性一般。眠性快，眠起齐一，行动活泼。壮蚕体色青白，素斑，形体稍显细长，食桑旺盛。熟蚕体色略呈肉色，老熟齐一，上蔟涌、营茧快。茧形椭圆形，茧色白，茧形大，缩皱中等。发蛾涌，交配性能好。产卵较快，产附良好。单蛾产卵480～530粒左右。 催青期经过10d，5龄经过7～8d，全龄经过24～25d。与秋*月或月*秋对交，应推迟2d出库催青。     

我国家蚕品种的变迁及现行品种种质基础分析

对国内蚕茧主产区当家蚕品种的变迁及近 1 0多年来国家审定通过的新品种分析后认为 ,大面积推广的蚕品种已完全是杂交种 ;近 1 0余年来国内新育成蚕品种的综合经济性状不断提高 ,但与日本同期蚕品种相比仍有一定差距。亲本利用趋于集中、品种亲缘关系相近、种质基础狭窄是造成这种差距的主要原因之一 ;品种存在着遗传上的种质脆弱性和突发毁灭性病害的隐患     

利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统在BmN细胞中可溶性表达PRG-1蛋白

杆状病毒Bac-to-Bac表达系统由于操作简便等优点,被广泛应用于外源蛋白的表达。利用新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac系统可溶性表达一个大分子质量的融合蛋白———piwi相关基因编码蛋白PRG-1。为了提高目的蛋白的表达量,对重组病毒感染剂量及产物收获时间进行优化,并利用GST亲和层析纯化融合蛋白。结果表明在家蚕卵巢培养细胞BmN中表达的重组GST-PRG-1是可溶性蛋白;最佳的感染条件是病毒粒子对BmN细胞的感染复数(MOI)=1,并在感染后96 h收获细胞。试验结果表明,新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统可用于大分子蛋白的可溶性表达。     

家蚕核型多角体病毒(陕西株)orf126基因的表达及与几丁质的体外结合实验

为研究家蚕核型多角体病毒(BmNPV)orf126基因(Bm126)在感染宿主中的作用机制,采用PCR方法从BmNPV陕西株中克隆了切除N端23个氨基酸(预测信号肽序列)的Bm126基因,并将其和谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合后在大肠杆菌中进行了表达。利用纯化的BM126重组蛋白与几丁质进行体外结合实验,Western blot分析没有检测到BM126重组蛋白与几丁质结合的复合物,推测原核表达的重组BM126融合蛋白在体外不能与几丁质结合。     

人肠道病毒71型类病毒颗粒在家蚕BmN细胞及幼虫体内的表达

人肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)是近年来暴发危害较严重的手足口病的病原。利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕卵巢培养细胞(Bm N)中共表达EV71病毒衣壳蛋白VP1与VP2,分析二者组装成病毒样颗粒(VLPs)的效率,比较用不同启动子构建重组病毒的表达效果,并利用家蚕幼虫进行2种蛋白质的共表达及VLPs纯化条件的研究。结果表明,重组病毒v Bm Bac-vp1-vp2与v Bm Bac-vp1-IRES-vp2均可介导EV71的VP1、VP2蛋白在Bm N细胞中表达,并能够组装成病毒样颗粒,但采用Pph及Pp10启动子的表达和组装效率明显高于Pph及IRES启动子组合;将重组病毒v Bm Bac-vp1-vp2以1×10~4TCID_(50)/头的剂量注射5龄起蚕,Western blotting检测到VP1在幼虫血淋巴中特异性表达,并且随着感染时间的延长表达量增加;经蔗糖梯度密度离心能够有效地纯化蚕体血淋巴中的病毒样颗粒。研究结果为后续EV71疫苗研制奠定了一定的试验基础。