响应面优化超声辅助提取黄瓜皮多酚工艺及其抗氧化活性研究

应用响应面法对超声波辅助提取黄瓜皮多酚的工艺进行优化,并对多酚的抗氧化活性进行了研究。以多酚提取率为响应值,选取超声温度、乙醇浓度、液料比、超声时间为自变量,应用Box-Behnken对试验进行设计和响应面优化,并通过多酚对羟自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除效果来评价其抗氧化活性。结果表明,黄瓜皮多酚的最佳提取工艺为:超声温度65℃,乙醇浓度62%,液料比26∶1(mL/g),超声时间31 min。在此条件下,测得多酚提取率实际值为(10.29±0.14)mg/g,理论值和实际值相对误差是0.39%,由此可以说明应用响应面法所得到的提取工艺参数可行性强、可靠性高。黄瓜皮多酚对·OH和DPPH·清除率的IC50值分别为116.60 mg/L和57.41 mg/L,表明黄瓜皮多酚具有较好的抗氧化活性,且抗氧化活性与多酚浓度呈正相关,该研究为将黄瓜皮多酚开发成天然抗氧剂提供理论基础。     

牛脂肪间充质干细胞对金黄色葡萄球菌生长的影响

为探讨成体奶牛脂肪来源的间充质干细胞(bAD-MSCs)对奶牛乳腺炎来源的金黄色葡萄球菌生长的影响,首先分离纯化来自奶牛乳腺炎病例中的金黄色葡萄球菌,并通过比浊法测定其在细胞用培养基中的生长曲线,进一步通过将金黄色葡萄球菌与奶牛脂肪间充质干细胞共培养及体外平板计数法来探讨奶牛脂肪间充质干细胞对金黄色葡萄球菌体外增殖的作...     

奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的建立及奶牛脂肪间充质干细胞对其迁移的影响

【目的】探讨奶牛脂肪间充质干细胞（bovine adipose-derived mesenchymal stem cells,bAD-MSCs）对氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力的影响。【方法】使用0、5、25、50、100、200 μmol/L H₂O₂处理奶牛子宫内膜上皮细胞2、4、6、8、12 h后,通过MTT试验检测细胞存活率、流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）水平来筛选H₂O₂诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型的最佳条件。在细胞划痕试验中设立对照组、H₂O₂组、bAD-MSCs共培养组（1∶0.5）、bAD-MSCs共培养组（1∶1）、奶牛乳腺上皮细胞（MACT）共培养组（1∶0.5）和MACT共培养组（1∶1）共6组,分析奶牛子宫内膜上皮细胞迁移能力,并利用Western blotting检测细胞外蛋白调节激酶（Erk）和磷酸化细胞外蛋白调节激酶（pErk）蛋白的表达水平。【结果】MTT试验结果显示,4~12 h内50 μmol/L H₂O₂组细胞存活率为50%~80%,适用于构建氧化应激模型。流式细胞术结果显示,用50 μmol/L H₂O₂刺激奶牛子宫内膜上皮细胞2 h时,ROS水平显著高于对照组与4、6、8、12 h组（P<0.05）。划痕试验结果显示,与对照组相比,H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力显著降低（P＜0.05）;与H₂O₂组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移能力均显著增加（P＜0.05）,MACT共培养组细胞迁移能力均显著降低（P＜0.05）。Western blotting结果显示,与对照组相比,H₂O₂组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与H₂O₂组相比,bAD-MSCs共培养组奶牛子宫内膜上皮细胞中pErk蛋白表达水平均显著升高（P＜0.05）,MACT共培养组细胞中pErk蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。【结论】50 μmol/L H₂O₂处理2 h可成功构建奶牛子宫内膜上皮细胞氧化应激模型,bAD-MSCs可促进氧化应激条件下奶牛子宫内膜上皮细胞的迁移并参与调控Erk蛋白的表达。     

两种奶牛真皮成纤维细胞分离培养方法的比较

为了比较两种体外分离和培养奶牛真皮成纤维细胞方法，采集奶牛蹄部真皮组织，通过组织块贴壁法和双酶消化法（胰蛋白酶-Ⅰ型胶原酶）分离原代奶牛真皮成纤维细胞，通过传代培养进一步纯化并扩增。利用显微镜观察细胞形态及生长特性，MTT法用于绘制细胞生长曲线，利用细胞免疫荧光技术检测其表面标志物，鉴定细胞纯度。倒置显微镜下观察，贴壁后第6天有细胞爬出，形态多呈长梭形，排列紧密呈漩涡状或束状；双酶消化组第2天有长梭形细胞生长，混杂少量上皮细胞生长。生长曲线图表示，组织块贴壁组细胞生长速度较快。免疫化学荧光检测第四代奶牛真皮成纤维细胞，波形蛋白呈阳性表达，角蛋白-18呈阴性表达，表示细胞纯度较高。两种方法均能分离出奶牛真皮成纤维细胞，与双酶消化法相比，组织块贴壁法分离的细胞纯度更高，活性更佳，增殖周期更短，提示组织块贴壁法是分离培养奶牛真皮成纤维细胞的首选方法。     

灌服酒炙车前子活性组分的胎衣不下奶牛血清代谢产物LC-MS/MS法分析

早期研究过程中发现活性组分Ⅲ和Ⅵ为治疗奶牛胎衣不下的有效物质，并已阐明其化学成分，但尚未鉴定活性组分在体内的代谢产物，因此研究旨在利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）对活性组分Ⅲ和Ⅵ的血清样品进行分析。以ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为色谱柱条件，流动相以水（含0.05%甲酸）-乙腈进行梯度洗脱，采用ESI电喷雾离子源，正、负离子模式下收集活性组分Ⅲ和Ⅵ的血清样品的质谱数据，并根据碎片离子以及相对分子质量等信息与网络数据库以及相关参考文献进行比对。活性组分Ⅲ发现包括胺类、脂类在内的共24个化合物，活性组分Ⅵ包括酚类、烷类等共26个化合物，为研制高效、经济和便捷的防治奶牛胎衣不下的中药针剂提供了新方向。