EHP、SHIV双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的构建及应用

本研究根据GenBank中已有的虾肝肠胞虫(EHP)和虾血细胞虹彩病毒(SHIV)基因的保守序列,设计特异的引物和探针.建立了快速诊断EHP和SHIV的双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、敏感性和稳定性进行检测.结果表明:该方法检测限可达10 copies/μL,其敏感性是SYBR Green r...     

一例羊驼感染支原体的病例报告

该文对珠海台创园羊驼养殖基地出现的羊驼死亡病例进行病理剖检、组织病理学和血液学检查、分子生物学检测。血常规及生化检查提示羊驼出现炎症，尸体剖检和切片检查显示多器官充血和出血，通过PCR及序列测定确认该羊驼存在念珠菌性肺支原体感染。本文通过对该病例的确诊，积累了同类疫病防控的经验。     

传染性脾肾坏死病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立传染性脾肾坏死病毒（infection spleen and kidney necrosis virus,ISKNV）的定量快速检测方法，根据GenBank中的ISKNV衣壳蛋白（MCP）编码基因保守序列设计一对特异性引物和探针，建立了ISKNV TaqMan荧光定量PCR检测方法，并对其特异性、敏感性和重复性进行了检测。结果显示：以重组质粒标准品构建的标准曲线相关系数为0.997，具有良好的线性关系；检测下限为10 copies/μL，敏感性是常规PCR的10倍；对传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病毒、黄颡鱼杯状病毒、大口黑鲈虹彩病毒、鳜鱼弹状病毒的检测结果均为阴性，仅ISKNV检测结果为阳性；批次内和批次间的变异系数均小于2%。应用建立的方法对已知结果的233份临床样品进行检测，检出76份阳性、157份阴性，与已知结果一致。结果表明，建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有敏感、快速、特异以及可定量、重复性好等优点，可用于ISKNV感染的快速鉴别诊断、定量检测以及分子流行病学调查。