猪弓形虫病的研究进展

弓形虫病是一种分布广泛、危害严重的人畜共患病,不但在公共卫生上有很重要的意义,对养猪生产也曾造成过巨大经济损失。近年来,各国学者在猪弓形虫病的流行病学、临床表现、诊断方法以及防治等方面都进行了研究,本文就该病进行简要概述。     

弓形虫微线体蛋白MIC3基因的克隆及原核表达

根据编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的全长基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列（AJ132530）的同源性达99.6 %,表达的MIC3融合蛋白表观分子量约为66 ku,且可被兔抗弓形虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础.     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

几种不同免疫程序制备抗弓形虫高免血清的比较

用弓形虫血清抗体阴性的健康家兔,以4种不同的免疫程序皮下接种弓形虫速殖子裂解抗原制备高免血清.研究结果表明,先以完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂分别进行一免和二免,然后再以抗原进行三免或四免制备高免血清,其抗体效价高达1:4096(IHA),与每次都使用抗原的传统免疫程序制备的抗体效价相当,但所用抗原剂量减半,该法优于另外2种免疫程序.     

组合预测方法在大气环境评价中的有效应用

介绍了组合预测方法的基本原理,对基于该方法的大气质量中长期预测进行了详细地研究,并以某项目为例,对组合预测方法中的Aermod模式在大气环境评价中的有效应用展开了探讨,以期促进大气环境评价工作更好开展。     

弓形虫MIC3基因真核表达质粒的构建及在 IBRS-2细胞内的表达

采用PCR技术从弓形虫RH株的基因组DNA中扩增编码MIC3的基因,克隆入pMD18-T载体,转化至E.coliDH5α感受态细胞,经抗性平板筛选、小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定后,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1。然后筛选含有目的基因的重组质粒,并转染IBRS-2细胞,在G418压力下进行筛选,利用SDS-PAGE、Western blot和ELISA检测表达情况。结果显示,扩增的MIC3基因与GenBank上相应基因序列(AJ132530)的一致性达99.9%,构建的真核表达质粒pcMIC3能在转染的IBRS-2细胞中表达分子量约为39.2ku的MIC3,且表达的蛋白质具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。     

蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体.对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法.在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的栓出率则与MAT法相同.Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好.上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测.     

猪蛔虫rAs37基因的克隆及原核表达

根据编码rAs37的已知基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术从猪蛔虫感染性虫卵的cDNA中扩增编码rAs37的部分基因,克隆入pGEX-KG表达载体,转化入E.coli DH5α感受态细胞,经含氨苄青霉素琼脂平板筛选,小量抽提质粒进行酶切、PCR及DNA测序鉴定.然后阳性重组质粒转化入E.coli BL21-CodonPlus, IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定.结果显示,扩增的rAs37基因与GenBank中相应基因序列(AB078971)的同源性达100%,表达的rAs37融合蛋白表观相对分子质量约为60 000,且可被兔抗猪蛔虫免疫血清识别.说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立猪蛔虫早期诊断方法和研制猪蛔虫的亚单位疫苗奠定了基础.     

弓形虫ROP2基因的克隆及原核表达

应用PCR技术从刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）RH株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白ROP2（rh—potryprotein2）的部分基因，构建pGEX—KG—ROP2重组表达质粒，经酶切、PCR及DNA测序鉴定后，将阳性质粒转入E．coli BL21CodonPlus中，在IPTG诱导下表达，表达产物用SDS—PAGE和Western—blot分析鉴定。结果表明，扩增的ROP2基因与GenBank上发表的相应基因序列的同源性达99.9％，该基因可以在大肠杆菌中高效表达，表达的ROP2融合蛋白表观相对分子质量约为64000，可被兔抗弓形虫免疫血清识别。     

ELISA和LAT检测猪血清弓形虫抗体的比较

应用弓形虫重组蛋白rMIC3为抗原建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)2种方法,平行检测来自36个猪场的471份猪血清中的抗弓形虫特异性抗体。结果显示,ELISA和LAT对母猪弓形虫抗体的阳性检出率分别为42.86%(21/49)和44.90%(22/49),2种方法的阳性检出符合率为95.45%(21/22);对育肥猪的阳性检出率分别为42.06%(135/321)和43.61%(140/321),2种方法的阳性检出符合率为93.57%(131/140);对仔猪的阳性检出率分别为29.07%(30/101)和45.54%(46/101),2种方法的阳性检出符合率为63.04%(29/46)。结果表明,ELISA和LAT可用于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于仔猪弓形虫病的检测。