山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

云南半细毛羊毛囊干细胞生物学特性分析

为研究云南半细毛羊毛囊干细胞（hair follicle stem cells,HFSCs）的生物学特性,采用组织块法分离培养云南半细毛羊HFSCs,并对其细胞形态、生长动力学、冷冻与复苏、染色体核型等生物学特性进行分析.结果表明：HFSCs为贴壁生长,体积小,核质比高,呈典型的铺路石状,在显微镜下折光性强、胞体透亮.细胞生长曲线为“S”型.冻存前细胞活率98.2％,复苏后细胞活率96.4％.染色体中正常二倍体数目2n=54,其中,长染色体中有3对为中着丝点染色体,23对为端着丝点染色体,X染色体为最大的近端着丝点染色体,Y染色体为最小的亚中着丝点染色体.所得细胞呈现典型的HFSCs特征,细胞活性好,细胞系为稳定的二倍体细胞系.     

白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的影响

试验旨在研究白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的改善效果。采用假阴道法采集6只云南半细毛羊精液，用含不同浓度（0、0.1、1、10、20 μmol/L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装，低温平衡和液氮气相预冻后，在液氮中保存30 d。解冻后测定精子活力、质膜完整性、磷脂酰丝氨酸（PS）分布、顶体完整性和活性氧等指标。结果表明，解冻后10 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为76.14%±0.97%、43.56%±0.91%、43.24%±1.68%，均显著高于其他各组（P<0.05）；而20 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为21.78%±0.79%、25.23%±1.34%、4.84%±0.68%，均显著低于其他各组（P<0.05）。10 μmol/L白藜芦醇组精子顶体完整性最高，为50.47%±0.91%，显著高于其他各处理组（P<0.05）。PS分布结果表明，10 μmol/L白藜芦醇组正常精子百分率为46.43%±2.95%，显著高于20 μmol/L组（31.14%±3.56%，P<0.05），与其他各组无显著性差异（P>0.05）。20 μmol/L白藜芦醇组PS标记率（39.82%±3.38%）显著高于其他处理组（P<0.05）。活性氧试验结果表明，10 μmol/L白藜芦醇组正常精子（63.57%±0.71%）显著高于其他各组（P<0.05）；而20 μmol/L白藜芦醇组正常精子（32.45%±1.42%）显著低于其他各组（P<0.05）。综上，在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可以改善绵羊冷冻精液品质，这与白藜芦醇的抗氧化特性有关。但是，白藜芦醇的冷冻保护效果具有明显的浓度依赖性，其最佳作用浓度为10 μmol/L，过高浓度的白藜芦醇反而加重精子的冷冻损伤。此外，对于白藜芦醇对绵羊精子的抗冻保护效果仍然需要体外受精或人工授精验证。     

猪卵母细胞在GV期与MⅡ期的冷冻保存效果比较研究

为比较猪卵母细胞在GV期与MⅡ期的冷冻保存效果,试验在这两个成熟阶段对其进行玻璃化冷冻,GV期卵母细胞解冻后培养至成熟,MⅡ期卵母细胞解冻后恢复2 h,然后采用免疫荧光标记、Western blotting和链霉蛋白酶溶解方法分别检测它们的皮质颗粒分布、CD9蛋白表达水平和透明带消化时间上的差异。结果表明,GV期卵母细胞在解冻后2 h的存活率显著低于MⅡ期卵母细胞（P<0.05）,但极体排出率与对照卵母细胞无明显差异（P>0.05）;在冷冻MⅡ期卵母细胞中,皮质颗粒的皮质区分布比例和CD9的蛋白表达水平显著下降（P<0.05）,但冷冻GV期卵母细胞经体外成熟后则无明显变化（P>0.05）;冷冻GV期与MⅡ期卵母细胞均不会影响透明带的消化时间（P>0.05）。由此可见,猪卵母细胞在GV期的冷冻存活率虽然较MⅡ期低,但其体外成熟后极体排出率、皮质颗粒分布和CD9蛋白表达水平均未受到冷冻的影响。     

胎牛血清在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用研究

【目的】研究胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)在猪孤雌囊胚玻璃化冷冻后恢复培养中的作用。【方法】本试验以体外培养第5天的猪孤雌激活囊胚为材料,将新鲜和冷冻囊胚分别在含10%FBS(V/V)的胚胎培养液中继续培养48 h,即分为新鲜组(Fresh)、新鲜+FBS组(Fresh+FBS)、冷冻组(Vitrified)、冷冻+FBS组(Vitrified+FBS)。观察各组囊胚的扩张和孵化能力,检测胚胎的细胞膜损伤、凋亡细胞数目、总细胞数目、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体活性以及发育相关基因的表达水平。【结果】与Fresh和Vitrified组相比,Fresh+FBS和Vitrified+FBS组的完全扩张率、孵化率和囊胚细胞总数均显著提高(P<0.05),细胞膜损伤率和细胞凋亡率均显著降低(P<0.05)。与Fresh组相比,Vitrified组ROS水平显著升高(P<0.05),Fresh+FBS和Vitrified+FBS组ROS水平均显著降低(P<0.05)。Vitrified+FBS组的线粒体活性显著高于Vitrified组(P&l...     

一种适用于羊的精液稀释液应用

正由于精液冷冻保存解冻后精子活力低、较难通过子宫颈进行深部输精、输精后妊娠率低等原因,使得解冻输精技术未能在生产上广泛使用,鲜精稀释后使用依然为当前羊人工授精的主流方式。精液在稀释过程中因成分发生改变会引起精子理化性质的变化,甚至给精子带来致命打击。因此,筛选出合适、方便且拥有实践应用价值的精液稀释液和稀释倍数,对提高羊人工授精技术的普及率和效率有重要的意义。现实生产中应用的稀释液有维生素B12注射液、鲜奶     

云南半细毛羊毛囊干细胞表面标记物的鉴定

设计8对引物（CK14、CK15、CK19、CD34、CD271、CD200、nestin和β1）,分别扩增云南半细毛羊成纤维细胞和毛囊干细胞表面标记物.结果表明：在成纤维细胞中CK19和β1表现为阳性,而在毛囊干细胞中CK14、CK19和β1表现为阳性,其他标记物的表达都为阴性.因此,CK14可以作为鉴定云南半细毛羊毛囊干细胞的表面标记物之一.     

羊电刺激采精技术

正20世纪90年代以后,肉羊生产快速发展,养羊业由分散型、小规模、传统的粗放经营管理向集约型、规模化、舍饲精细化管理转变,随着近年来国家草原生态保护奖励机制和禁牧、草畜平衡制度的实施,传统的分散放养型饲养模式正向集中舍饲和企业规模化经营模式转变,羊的人工授精技术再次受到规模化养殖企业的重视和应用。人工授精技术的使用不仅可以节约购买和饲养大量种公羊的成本,还能最大限度地发挥优秀公羊种用价值,提高繁殖效率,因此,越来越受到世界各国的普遍重视。而采集种公羊精液是人工授精的重要环节之一,常用的假阴道法对性情暴烈、胆小易惊、遇到发情母羊不追     

云南黑山羊繁殖性能研究

良种缺乏是制约云南省肉羊产业发展的关键因素。针对这一问题,课题组正在培育肉用黑山羊新品种——云南黑山羊。本研究系统分析了云南黑山羊核心育种场2012—2017年云南黑山羊的繁殖性能。结果表明,云南黑山羊母羊的初配日龄为(306.34±6.57)d、初配体重为(36.72±3.06)kg;公羊初配日龄365.0 d、初配体重为(59.28±5.58)kg;母羊妊娠天数为(148.90±2.78)d;初产母羊的产羔率为181.73%、经产母羊为226.06%;公、母羔的初生重分别为(3.55±0.69)kg、(3.26±0.64)kg;公、母羔70日龄的断奶重分别为(20.35±4.49)kg、(16.09±2.88)kg;断奶羔羊的成活率平均为88.28%;母羊的利用年限为6~7年。公羊阴囊围随月龄增加呈上升趋势,6月龄后其阴囊围保持稳定;成年公羊每次射精量为(1.68±0.83)m L,精液密度为(2.53±0.79)×109/m L,精子活力(81.91±10.37)%,顶体完整性(89.79±9.31)%,精子畸形率(7.52±3.27)%。这说明相对于本地和其他地区黑山羊品种而言,正在培育的云南黑山羊具有较高的繁殖性能,主要体现为性成熟早、常年发情、一胎多产、断奶成活率高等特点。     

山羊精液冷冻保存研究现状、存在问题及展望

山羊精液的冷冻保存对于山羊遗传资源的长期保存和辅助繁殖技术研究具有重要的意义.我国山羊冻精技术的研究是从80年代才开始,到目前为止,在大多数的试验中,山羊冻精解冻后的活率不能稳定地超过50％[1].山羊精液在冷冻过程中要面临诸多挑战,主要包括温度变化冲击、渗透损伤、化学毒性损伤、氧化损伤、细胞凋亡、细胞内外冰晶的机械损伤等.另外,山羊精液中含有一种EYCE,这种酶可以和蛋黄发生相互作用,并最终导致精子的死亡,而其他家畜,如牛、猪和绵羊则缺少这种酶[2-3].