产气荚膜梭菌ε毒素重组突变体大肠杆菌表达条件的优化

本研究旨在优化产气荚膜梭菌ε毒素重组蛋白的表达条件,为下一步大规模生产ε毒素基因工程亚单位疫苗奠定基础。以本实验室构建的产气荚膜梭菌ε毒素重组突变体为基础,通过控制变量法确定诱导温度、诱导时间、IPTG诱导浓度以及诱导时菌液浓度等原核蛋白表达条件。结果表明,ε毒素的重组突变体在37 ℃、菌液OD600值为0.895~1.295时,以1.6 mM IPTG诱导6 h条件下可溶性表达量最高。     

狂犬病毒G蛋白原核表达及间接ELISA检测方法的建立

目前狂犬病疫苗的效力检验采用NIH法,需要使用狂犬病毒强毒株进行攻毒试验,具有一定的生物安全风险。为建立检测小鼠血清抗体效价的间接ELISA方法,代替NIH法中的脑内攻毒试验,扩增狂犬病毒（RV）G蛋白基因,并将其克隆至大肠杆菌pET-32a载体上进行表达。以该蛋白作包被抗原,摸索试验条件,建立检测小鼠血清抗体效价的间接ELISA方法。使用此方法与国际公认的荧光抗体病毒中和试验（FAVN）法比较,两者检测结果曲线相关系数为0.986,表明两者相关性较好,但ELSIA方法更加快捷、简便。本试验建立的间接ELISA方法可用于检测小鼠血清中狂犬病抗体,为狂犬病疫苗效力检验替代方法的建立提供了基础。     

实验动物设施常用消毒剂的中和剂验证试验

为了筛选出针对动物实验设施的几种常用消毒剂的中和剂,试验依据2002年版《消毒技术规范》中的中和剂中和效果验证方法,每组消毒剂设置相应的中和剂,设置6个试验组进行验证试验。结果表明:75%乙醇溶液可以选择含1%吐温80的PBS溶液作为中和剂,84消毒液可以选择含4%硫代硫酸钠的PBS溶液作为中和剂,苯扎溴铵溶液可以选择含1%吐温80、0. 5%卵磷脂的PBS溶液作为中和剂,戊二醛溶液可以选择含1%甘氨酸、0. 5%吐温80的PBS溶液作为中和剂。使用0. 5%或2%硫代硫酸钠溶液作为过氧乙酸和过氧化氢消毒液的中和剂时未能完全达到中和试验结果的要求。     

卵黄抗体三种提取方法的比较研究

运用硫酸铵法、聚乙二醇(PEG)法、冷乙醇法对卵黄抗体进行提取,并使用间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定所得卵黄抗体的特异性,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测其纯度,用Nanodrop2000测其蛋白浓度并计算提取量,比较三种方法所得抗体的特异性、纯度和提取量。结果显示,三种提取方法所得卵黄抗体特异性高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;纯度高低依次为硫酸铵法、冷乙醇法、PEG法;三种方法的提取量高低依次为PEG法、硫酸铵法、冷乙醇法。经综合分析与评价,硫酸铵法的抗体特异性较好、纯度较高、提取量也较高,且其操作方法相对简便,是比较具有优势的提取方法。     

山羊痘病毒检测方法研究进展

就山羊痘病毒分离鉴定、电镜观察、ELISA试验、琼脂扩散试验、免疫荧光抗体试验、PCR试验等检测方法进行了综述,以期为山羊痘病毒的实验室诊断提供参考。     

动物布鲁氏菌病实验室检测技术研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病,对我国畜牧业生产和公共卫生安全造成严重的威胁。科学准确诊断是布鲁氏菌病防控的重要技术依据,然而布鲁氏菌病的检测和确诊一直以来都并非易事,常常需要通过多种检测结果的综合分析,因此发展敏感性高、特异性好的布鲁氏菌的检测技术十分重要。总结并分析了近年来布鲁氏菌检测技术基础研究和临床应用研究方面的最新进展,结合国家动物布鲁氏菌病参考实验室工作经验,对各类检测方法的优缺点和适用范围进行了分析,旨在为动物布病诊断技术的选择和推广应用提供理论和实践依据,为动物布鲁氏菌诊断技术的研究提供方向性思考。     

鹿布鲁氏菌病诊断与防控研究进展

布鲁氏菌病(布病)是一种重要的人兽共患传染病,可感染多种动物,其中鹿科动物是重要的宿主之一。随着我国经济动物养殖规模的扩大和发展以及野生鹿群资源保护的需求,鹿布病流行情况和防治措施具有重要的公共卫生意义。本文就国内外鹿布病的流行情况、临床症状,诊断及预防等情况进行综述,为我国鹿布病防控提供参考与建议。