禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化

利用原核表达的禽白血病病毒(ALV)P27蛋白作为抗原制备的单抗作为包被抗体,以制的酶标兔抗P27作为酶标抗体,在国内首次建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELISA方法.该方法对禽白血病P27抗原的最小检出量为5 ng/mL,通过统计学试验证明自制的诊断试剂具有良好的特异性和稳定性.与IDEXX试剂盒的平行实验确定自制诊断试剂S/P＞O.17为阳性判定标准.应用此方法对北京附近鸡场对抽样检测687份蛋清样品,检测结果与IDEXX的禽白血病抗原检测试剂盒符合率达到100%.     

酵母培养物对犊牛血浆内毒素的调控研究

本研究包括2个试验:试验一,随机选取健康犊牛12头(均为荷斯坦品种),按日龄和体重相同或相似的原则进行配对,分为试验组(A)和对照组(B),每组各6头犊牛。两组饲养管理相同,但试验组添加酵母培养物30 g/d.头(分3次口服)。从5日龄开始,每隔10 d从犊牛颈静脉采血5 m l,放入加有抗凝剂(10?TA两滴)的离心管中,分离血浆,当天用鲎试剂法测定血浆内毒素含量。共采血4次,结果发现试验开始后第10、20、30 d,试验组血浆内毒素的平均含量分别降低了0.32(P<0.01)、0.5(P<0.05)和0.25 EU/m l(P<0.01),显著低于对照组;试验二,随机选取腹泻犊牛12头,按日龄和体重相同或相似的原则进行配对,分为试验组(C)和对照组(D),每组各6头。两组饲养管理均相同,视情况两组均采取传统治疗方法(抗生素治疗、输液、补碱、止泻等),但试验组从腹泻之日起每天添加酵母培养物75 g/头,分3次口服,直到腹泻临床症状消失。在治疗之前采集每头犊牛血液,以后隔日采血1次,当天用鲎试剂法测定血浆内毒素含量。每天记录粪便情况,直至腹泻犊牛痊愈为止。结果发现试验开始后第2、4、6 d试验组血浆内毒素的平均含量分别降了0.52(P<0.05)、0.22(P<0.05)和0.22EU/m l(P<0.05),显著低于对照组;粪便情况两组差异极显著(P<0.01);试验组病程比对照组缩短28%。     

利用VP3蛋白初步建立鸡传染性法氏囊病间接ELISA方法

本研究对从河北某鸡场分离的IBDV分离株的VP3基因进行了克隆和表达,将表达蛋白用亲和层析的方法进行纯化,纯化后的蛋白包被ELISA反应板,初步建立了一种用于检测IBDV抗体的间接ELISA方法。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达

IBDV是一种无囊膜的双节段双股RNA病毒，属于双RNA病毒科（Birnaviridae），禽双链RNA病毒属（Avibirnavirus），IBDV基因组由A、B两个双链RNA节段组成，A节段编码VP2、VP3、VP4、VP5蛋白，B节段编码VPI蛋白。