鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立

为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5'CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3',E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。     

鲑甲病毒的传入风险评估

目前我国尚未有发现鲑甲病毒(SAV)感染的相关报道。如果SAV随进口贸易的鱼类进入我国,会给我国的水产养殖业造成很大的损失。为了保障我国水产养殖业的健康发展,针对进境水生动物种类开展了SAV跨境传播的风险评估,并提出了科学的风险管理措施。综合风险分析认为,我国传入SAV的主要威胁是来自疫区的活的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟,其次是冰冻和冰鲜的大西洋鲑、褐鳟鱼和虹鳟。建议对活的、冰冻和冰鲜的易感鱼类以及用做鲜活饵料的鱼类,禁止从疫区进口;鱼肉、加工后的制品以及其它非易感鱼类是低风险的,可以自由贸易;对运输活鱼的水、包装等要进行强制常规消毒,无需检测。