鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。     

鸡传染性法氏囊病和大肠杆菌病混合感染的诊治

发病情况某养鸡场2008年6月中旬购进1000羽海兰商品蛋鸡,采用地面平养,垫料育雏,喂全价颗粒饲料.该鸡群在18日龄时,曾用鸡传染性法氏囊病疫苗饮水免疫.饲养至41日龄时突发疫情,并很快波及整个鸡群.发病后1～2d共死亡13羽,第3天死亡48羽,第4～6天死亡133羽,第7～10天死亡59羽.这次疫情的最终发病率高达70%之多,死亡率达24%左右.发病后,虽曾用一般抗生素和抗病毒药物进行抢救性治疗,但未能控制疫情的发展和蔓延,经济损失较为惨重.     

山东省外观健康羊群中检出羊边界病病毒

2014年从山东省外观健康的牛羊采集鼻拭子样品共707份,提取其RNA,用流感病毒特异性引物进行RT-PCR检测。对RT-PCR扩增的阳性产物进行序列测定,意外发现其中1份羊拭子样品含有羊边界病病毒,并且该结果得到其他试验验证。结合我国2012年首次在安徽和江苏两地检出该病毒,以及当前我国羊群流通情况,推测该病毒可能在我国有所存在。该调研结果对分析各类RT-PCR检测的假阳性产生原因,有参考意义。并提示RT-PCR检测结果难以作为疫病或感染病诊断的确切依据。其诊断结果有时需要用荧光探针或测序进行进一步鉴定。     

H5亚型高致病性禽流感病毒抗原性变异分析

为深入了解我国H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原性变异情况及其规律,对我国2012—2015年分离的H5亚型高致病性禽流感病毒进行了HA基因的扩增、测序与遗传进化分析。结果发现这些流行毒株主要分布在第2.3.2.1分支、第2.3.4.4分支和第7.2分支。制备流行毒株的单因子阳性血清,与相应疫苗株进行交叉血凝抑制试验,计算抗原相关系数,并对各分支流行毒与相应疫苗之间的HA1主要抗原位点差异进行分析。结果表明,Re-4、Re-5、Re-6、Re-7、Re-8疫苗株之间的血凝抑制抗原相关系数在0.17~0.67之间,表明不同分支之间的抗原性有较大差异。随着时间的推移,分支内流行毒与疫苗之间的血凝抑制抗原相关性差异会越来越大,抗原性变异程度增加,这与HA1主要抗原位点差异分析的结果一致。因此,要取得理想的防控效果,必须及时更新疫苗,使用与流行毒匹配性更好的疫苗。这些数据为深入了解H5亚型高致病性禽流感病毒的抗原变异和对该病毒的防控提供了技术支持。     

动物血清库管理系统的应用

在动物流行病学中一个很重要的概念就是动物血清库(serum bank)。科学开展动物血清管理工作,对于掌握动物疫病分布情况,分析疫情发生发展规律,开展疫情预警预测具有重要意义。国家动物血清库运行十余年来,在动物免疫情况调查和疫情追溯等方面发挥了重要作用。但随着血清收集数量的逐年增加以及种类的不断增多,传统的管理方式暴露出库存量反映不及时、不准确、容易发生漏错,     

青岛即墨鹦鹉幼雏病的诊断及病毒VP1基因序列分析

2008年7月末,青岛即墨地区爆发流行一种以15日龄以下幼雏鹦鹉呈腹泻、羽毛发育障碍为临床特征、高度致死性传染病。剖检可见肝脏肿大、心脏肿大、心包积液、肾脏肿大等病变。根据临床症状,结合本地流行史,怀疑为鹦鹉幼雏病(BFD)。随后,利用PCR对从两个发病户带回的4只濒死鹦鹉进行BFDV的检测,结果核酸扩增为阳性,并对扩增的VP1基因序列进行了测序与分析。结合临床症状、流行病学特征和实验室诊断,确诊此次疫情为鹦鹉幼雏病。     

一例雏鸭病毒性肝炎与曲霉菌病混合感染的诊治与体会

<正>华北地区某养鸭户于2010年4月从某孵化场购进2000羽樱桃谷肉鸭苗,育雏期为地面垫锯末散养。棚内垫料潮湿,空气污浊,散发刺鼻氨味和霉味。所用饲料以玉米、豆饼和青菜为主,自配自用。因为前期出栏肉鸭没有发生任何疫病,故存在侥幸心理,这群鸭也没有做任何疫苗免疫。肉鸭苗从6日龄开始发病,当日死     

一例鸡传染性法氏囊病和大肠杆菌病混合感染的诊治与体会

通过对某养鸡户发病三黄雏鸡现场调查、病(死)鸡临床表现和剖检病变,以及实验室检验的结果,确诊为鸡传染性法氏囊病和大肠杆菌病混合感染症。通过采取一系列治疗措施,疫情得到有效控制。     

对一株超强马立克氏病毒株的检测和研究

对从发病鸡场分离到的一株超强马立克氏病毒株,用PCR扩增该分离毒株的meq致瘤基因并测定了其序列,发现其与超强病毒株SD2012-1的核苷酸同源性为99%。该分离毒株的meq基因序列在第575～577位比疫苗株CVI988/Rispens的meq基因序列多插入3个碱基（CAC）,与SD2012-1相同。使用该分离毒株进行疫苗免疫攻毒实验,未免组的发病率为80.0％,常规剂量HVT组和10×常规剂量HVT组的发病率分别为73.0％和76.6％,HVT不能提供有效免疫保护。常规剂量CVI988组和10×常规剂量CVI988组的发病率分别为30.0％和30.0％,常规剂量HVT+CVI988组和10×常规剂量HVT+CVI988组的发病率分别为26.6％和26.7％,免疫CVI988疫苗组鸡和HVT+CVI988联苗组鸡的发病率比免疫HVT疫苗组鸡低。说明,野外毒株的不断变异已经突破现有疫苗的免疫保护,会给养鸡业带来严重的损失。