抗菌肽SMAP-29基因密码子优化及其毕赤酵母表达载体构建

以GenBank发表的绵羊骨髓抗菌肽(SMAP-29)基因(L46854)为模板,选择毕赤酵母偏好密码子,合成SMAP-29成熟肽基因。将合成的基因克隆入pPIC 3.5K载体中构建重组酵母胞内表达载体pPIC 3.5K-SMAP-29,经酶切分析、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。表达载体的正确构建为SMAP-29的高效表达和生物学活性研究奠定基础。     

捻转血矛线虫Hc38基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达

参照捻转血矛线虫Hc38基因核酸序列(登录号:AY749124)的保守结构域设计1对引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约429 bp的cDNA序列,将其克隆到pMD19-T中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定.与AY749124序列同源性为99%.进一步将克隆基因与原核表达载体pPRO EX HTa构建重组表达载体,经IPTG诱导,能在DH5a细菌中表达了相对分子质量约17 000的融合蛋白.经Western blot等检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与捻转血矛线虫阳性血清发生特异性反应.     

牛病毒性腹泻病毒石河子株E2基因的克隆及其表达载体的构建

应用RT-PCR方法从牛病毒性腹泻病毒(BVDV)新疆石河子分离株中扩增了E2基因,命名Shihezi 148(GenBank登录号:EU159699),扩增序列分析结果表明:Shihezi 148 E2基因长度为1121 bp,编码373个氨基酸残基;同源性分析表明,Shihezi 148与澳大利亚Bega株E2基因核苷酸同源性为88.32%,与中国changchun 184株的同源性为74.42%;通过基因重组技术构建了去除C端跨膜区的截短E2基因的原核表达载体pProEX HTa-E2和包括信号肽和全长E2蛋白的真核重组质粒pVAX1-E2。经过PCR、酶切及测序结果表明pProEX HTa-E2和pVAX1-E2重组表达载体构建成功。     

浅谈建筑节能与墙体保温

建筑节能的核心是对建筑物围护结构和采暖系统进行革新,其中墙体保温施工技术在建筑节能中发挥着越来越重要的作用。文章就墙体保温材料的种类、特点及发展前景进行了分析。     

不同蛋白能量比日粮对荷斯坦奶公犊育肥效果及血液生化指标的影响研究

利用3种不同蛋白能量比配合日粮对荷斯坦奶公犊进行育肥，结果表明：高蛋白能量比日粮组在整个育肥期平均总增重和平均日增重与低蛋白能量比日粮组差异显著（P<0.05），而中蛋白能量比日粮组同高、低2个蛋白能量比日粮组差异均不显著（P>0.05）。在3个试验组中，高蛋白能量比日粮组的饲料报酬和经济效益最高，中蛋白能量比日粮组次之，低蛋白能量比日粮组最低。不同日粮对血液生化指标产生一定的影响，但试验测定值均在正常的生理范围内。在采食试验日粮后，除低蛋白能量比日粮组的血清总脂比采食前有所降低外，各试验组的其它指标，如血清总蛋白、葡萄糖以及血清尿素氮的浓度都升高了。     

肉用细毛羊非繁殖季节诱导发情试验

非繁殖季节母羊的诱导发情技术是工厂化高效养羊生产体系中的关键技术,也是实现绵羊“一年两产”或“两年三产”等高效繁殖的重点技术之一,正在生产中被逐渐推广。但由于诱导发情效果除受动物品种、营养、年龄、季节的影响外,更重要的是受所用激素的种类、品质、剂量、用药方案及处理母羊所处生理状态的影响。试验选择处在不同生理状态的母羊230只,用复合孕酮结合CIDR PMSG HCG诱导发情、人工授精,探索不同生理状态母羊诱导发情及产羔的差异,为肉用绵羊非繁殖季节诱导发情技术的应用提供参考。1试验材料1.1时间和地点2004年3月12日—8…     

抗菌肽SMAP-29基因密码子优化及其在毕赤酵母中的表达

[目的]对抗菌肽SMAP-29的基因密码子进行优化,并使其在毕赤巴斯德酵母(Pichia pastoris)中表达。[方法]根据已知抗菌肽SMAP-29的氨基酸序列,参照毕赤巴斯德酵母密码子的偏好性,设计合成抗菌肽SMAP-29成熟肽基因片段,并同载体pPIC3.5K连接,电击转化至毕赤酵母受体菌GS115中,经G418筛选高拷贝转化子,并用MM、MD板和PCR法筛选Mut+表型。用甲醇诱导表达构建好的重组酵母表达基因工程菌,并裂解酵母细胞进行Tricine-SDS-PAGE分析。[结果]在诱导至第2天的细胞裂解液中检测到与预测的SMAP-29分子量相当,约为3.2 kD的表达带;表达产物对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌有明显的抑菌作用,而对大肠杆菌抑菌效果不明显。[结论]该研究为SMAP-29在生物医学、农业等领域中的应用奠定基础。     

抗菌肽SMAP-29研究进展

抗菌肽作为存在于生物体内一类具有广谱抗菌活性的多肽,是宿主非特异性防御系统的重要组成部分,在动物先天免疫机制中具有特殊的意义。目前,在哺乳动物体内发现的10多种抗菌肽都属于Defensins（防御素）和Cathelicidins两大家族。     

捻转血矛线虫虫卵的大量分离纯化

笔者采用虫体取卵和孵化后感染性幼虫直接在培养瓶瓶盖内收集的方法,获得了大量纯净单一的感染性幼虫,并且感染绵羊成功。再对感染绵羊直肠采粪收集虫卵,就可收集到大量纯种单一虫卵,进行三期幼虫的大量孵化。该试验解决了在寄生性线虫分子生物学研究中需要大量单一虫种的纯化分离问题。