O型口蹄疫病毒固相阻断ELISA抗体检测方法研究

以VP1蛋白为包被抗原,采用方阵滴定法确定抗原最佳包被浓度,最终确定固相阻断ELISA最适反应条件以及判定阈值,建立O型口蹄疫病毒衣壳蛋白抗体的固相阻断ELISA检测方法,并对该检测方法进行考核。试验结果表明,最佳抗原包被浓度为0.062 5μg/m L;兔抗血清最佳工作浓度为16 000倍稀释,酶标二抗为8 000倍稀释;抑制率大于20%为阳性,抑制率小于20%为阴性;该方法与常见病原体无交叉反应,特异性和敏感性好,可以检测O型口蹄疫病毒VP1抗体,评价口蹄疫疫苗的免疫效果。     

禽流感病毒H7N9亚型三重荧光PCR检测方法研究

目的建立一套能够同时检测禽流感病毒H7N9经典毒株和新型变异毒株的多重荧光定量PCR方法。方法以禽流感病毒H7N9亚型HA保守基因、HA裂解位点和NA基因为检测靶标,设计特异性引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性和敏感性验证。结果参考GenBank收录毒株序列设计引物;探针分别选用ROX、FAM、VIC为荧光基团;阈值设定原则以阈值线刚好超过阴性对照检测荧光曲线的最高点;试剂盒特异性好不受其他亚型流感病毒以及常见禽类病毒的干扰;灵敏度可以达到100~101个EID50。结论该研究建立的荧光PCR检测方法敏感特异,能够用于禽流感病毒H7N9毒株检测。     

紫外分光光度法测定藜蒿的硒含量

以邻苯二胺为显色剂,采用分光光度法测定藜蒿硒含量,在335 nm处吸光值与硒含量之间线性关系良好(r=0.999 7).不同生长期藜蒿硒含量在85.920～275.738 μg/g之间,加标平均回收率为98.55%,RSD(相对标准偏差)为0.21%.藜蒿叶中硒含量以5月份最高,茎中硒含量以7月份最高,总硒含量随着植株的成熟而增加.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测中包被抗原的研究

目的研究不同的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原性蛋白对PRRSV抗体ELISA检测效果的影响。方法将PRRSV重组N蛋白、M蛋白和CGP5蛋白3种蛋白抗原单独包被,灵敏度分别为85.0%、60.0%、50.0%。为进一步优化ELISA检测方法 ,以N蛋白为主包被蛋白,M蛋白和GP5蛋白以不同的比例混合包被,研究最佳包被条件。结果当N蛋白、M蛋白和GP5蛋白以5ng:5ng:5ng/孔包被时,敏感性和特异性均达到100%,混包效果优于抗原性蛋白单独包被。为今后PRRSV抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。