熊精子顶体反应的检测

用Ionophore A23187(I—A)和咖啡因诱发熊精子的顶体反应,采用台盼兰—姬姆萨染色进行检测。根据染色结果可将精子分为四类:a)有正常顶体的活精子,b)无正常顶体的活精子,c)有正常顶体的死精子,d)无正常顶体的死精子。其中B类精子的百分率与仓鼠卵穿透率呈强正相关(r=0.9426,n=6.P<0.01)。     

利用IVM/IVF技术生产试管犊牛的研究

本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛.结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％.体外受精卵分别在颗粒细胞单层(GCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01).若体外受精卵先在GCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％.由此表明,早期胚胎在其发育过程中至少存在着3个发育相期,即1～8细胞、8～16细胞和16细胞～囊胚3个阶段,各阶段需要不同的培养环境.IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％.第一头试管犊牛已于1993年4月18日凌晨产出.     

13/17易位纯合子猪培育成功

1990年10月我们用2头13/17易位杂合子公猪与4头13/17易位杂合子母猪交配,其中3头受孕.1991年2月相继产仔,3窝共产仔29头,到2月龄存活24头.经核型分析,发现有3种核型,其中13/17易位纯合子猪8头,其核型为:2n=36,XX或XY,rob(13/17);13/17易位杂合子猪10头,其核型为:2n=37,XX或XY,rob(13/17);正常核型猪6头,其核型为:2n=38,XX或XY.     

13／17染色体易位猪群Amy－2的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了１３／１７染色体易位纯合子、杂合子及染色体数正常猪群的血液淀粉酶－２（Ａｍｙ－２）的遗传多态性。结果：３群猪均表现出特殊的Ａｍｙ－２多态性分布，其Ａｍｙ－２位点受２对等位基因控制，除测得Ａｍｙ－２Ａ、Ａｍｙ－２Ｂ基因控制的Ａ、Ｂ带外，还测到１对迁移率比Ａ、Ｂ带快的Ｃ、Ｄ带；２对等位基因呈现出共显性特征，但除个别个体２对等位基因所控制的表型染色强度相同外，大部分个体出现Ｄ带染色较Ａ、Ｂ、Ｃ带弱的特点；不同核形猪群的基因频率和基因型频率有明显差异，个别个体缺乏Ａｍｙ－２Ｃ、Ａｍｙ－２Ｄ基因。     

牛GPAM基因分子克隆及编码区E1-76-C>T定点突变前后生物信息学对比分析

线粒体甘油-3-磷酸酰基转移酶基因(Mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAM)的主要作用是通过催化三酰基甘油和磷脂生物合成过程,从而促进动物机体甘油三酯的生成,并通过中心和外周调节作用,对哺乳动物脂肪沉积、能量消耗、胴体重以及整体的代谢进行调控。设计特定引物对牛GPAM基因编码区进行PCR扩增并进行了克隆及测序,并假定牛GPAM基因编码序列发生E1-76-CT点突变,通过生物信息学的方法,对牛GPAM基因突变前后编码产物的理化性质、结构与功能进行了对比分析,通过生物信息学对比分析得出,牛GPAM基因单碱基的改变可以影响到氨基酸的编码,在一级结构、二级结构和三级结构方面存在显著差异。     

13/17易位杂合子猪互交后代主要生理生化指标测定

1991年2月我们获得3窝13/17易位杂合子猪互交后代,经核型鉴定发现有3种不同核型,即正常核型(2n=38,XX或 XY)、13/17易位杂合子[2n=37,XX或XY,rob(13/17)]、13/17易位纯合子[2n=36,XX或XY,rob(13/17)].为了进一步探明13/17易位纯合子及杂合子的种质特性,我们对这3种核型的11项生理生化指标进行了测定.     

AI后移植IVF胚诱发黄牛－胎双犊的研究

在黄牛自然发情人工授精后的第７ｄ，再移植１枚体外受精胚胎，使受体牛同时怀有自身胎儿和与自身无血缘关系的胎儿，从而诱发一胎双犊。共对７头受精牛进行了人工诱发一胎双犊的处理，结果有３头受体牛妊娠分娩，妊娠率为３／７，产犊４头，双犊率为１／３。     

GPAM基因过表达载体的构建及其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达

线粒体3-磷酸甘油酰基转移酶(GPAM,glycerol-3-phosphate acyltransferase)是一种具有编码蛋白质功能的基因,位于牛的26号染色体上。GPAM酶参与催化三酰基甘油和磷脂生物合成反应的第一步,继而对甘油三酯的量进行调控,是生物体内一个必不可少的酶。试验以中国荷斯坦牛RNA反转录成cDNA,继而PCR扩增出GPAM片段,并连入pBI-CMV3载体,构建了pBI-CMV3-GPAM真核表达载体,并验证了其在奶牛乳腺上皮细胞中的表达情况。结果表明:成功构建了牛GPAM真核表达载体,并在体外奶牛乳腺上皮细胞中高效表达。     

13/17染色体易位纯合子猪(2n=36)与正常核型家猪(2n=38)的杂交试验

用13/17染色体易位杂合子猪互交获得的1头13/17染色体易位纯合子公猪[2n=36,XY,rob(13/17)]与4头正常核型母猪(2n=38,XX)交配,结果4头母猪全部妊娠并正常分娩.其产仔数分别为13,16,12,11,产活仔数分别为12,13,12,11;窝断奶头数分别为12,13,9,10.经核型鉴定,其后代全部为13/17易位杂合子[2n=37,XX或XY,rob(13/17)].此结果表明,13/17易位染色体的遗传完全符合孟德尔的遗传规律,13/17易位纯合子公猪具有正常的繁殖力.本杂交试验所产活仔48头,其性别比例为35?:13?,接近3:1的比例,经X~2检验不符合1:1的理论比率(X~2=10.08,P<0.01).此外,本杂交试验所产仔猪生长发育正常,并具有一定的杂合优势,这一结果为13/17易位纯合子猪的进一步推广应用,尤其是作为商品猪生产的杂交父本提供了可靠依据.