尼罗罗非鱼Smoothened的鉴定、表达模式及在精巢中的作用

为探究Smoothened (Smo)信号在精巢不同细胞增殖与存活中的作用,实验分离鉴定了尼罗罗非鱼smo (命名为Onsmo),检测了其在不同组织中的表达分布及在精巢中的细胞表达模式,在尼罗罗非鱼精巢组织的体外培养体系中,用Smo特异性激动剂SAG或抑制剂环巴胺分别进行处理,EdU掺入法及TUNEL法检测了处理后生殖细胞(Vasa⁺)、Sertoli细胞(Amh⁺)与Leydig细胞(Cyp17a1⁺)增殖或凋亡情况。结果显示,Onsmo开放阅读框全长2 478 bp,编码825个氨基酸,含有7次跨膜结构域,与人SMO氨基酸一致性达77%;Onsmo表达于包括精巢在内的多个组织;在精巢中,Onsmo在多种不同类型细胞表达,包括精原细胞、精母细胞、Sertoli细胞以及Leydig细胞;在精巢组织的体外培养体系中,SAG处理对精原细胞增殖具有显著促进作用,而环巴胺处理对Sertoli细胞、Leydig细胞凋亡具有显著促进作用。研究表明,On Smo信号在尼罗罗非鱼精巢精原细胞增殖与体细胞存活中具有重要作用。该研究首次证实...     

NAA与营养液浓度对鹅掌柴根系及枝叶生长的影响

采用水培技术对鹅掌柴[Schefflera octophylla(Lour.) Harms]的根系进行快速诱导和枝叶生长研究,用不同浓度的NAA和营养液对鹅掌柴枝条进行处理,通过试验统计和方差分析得出水培鹅掌柴的根系生长的最适NAA和营养液浓度,其最适根系生长的NAA浓度为15 mg/L,最适营养液浓度为200～300 mg/L,即为1/4配方标准液;水培鹅掌柴根系诱导成功后,在水培鹅掌柴后期生长及养护过程中,营养液浓度为500～600 mg/L,即为1/2配方标准液时,水培鹅掌柴的根系最发达且植株的枝叶最茂盛。说明,同一生长调节剂、同一营养液不同浓度下对水培鹅掌柴的影响存在较大差异。     

视黄酸信号通路在青鳉精原干细胞体外增殖与分化中的作用

为探究视黄酸(Retinoic acid, RA)在鱼类精原干细胞(Spermatogonial stem cells, SSC)增殖与分化中的作用,本研究首先以三荧光报告载体pGRY(延伸因子1α启动子驱动组蛋白H2B-绿色荧光融合蛋白、减数分裂联会复合体蛋白3(Scp3)启动子驱动嘌呤霉素红色荧光融合蛋白、精蛋白启动子驱动黄色荧光蛋白)转染青鳉精原干细胞系SG3,获得稳转细胞SG3-pGRY,然后分别在2D与3D培养条件下检测RA信号对其增殖与分化的影响。结果显示,稳转细胞SG3-pGRY的红色荧光可监测细胞内源性Scp3的表达,且细胞仍保持干性及分化潜能,表明其可用于监测细胞分化状态。在2D培养条件下,即在细胞培养板中待细胞生长密度约90%就进行传代培养,RA可显著抑制细胞增殖,其受体α、β、γ泛抑制剂BMS493可促进细胞增殖；第48 h,RA处理可下调细胞多能性相关基因pou5f3、klf4表达,上调减数分裂相关基因dazl表达,但对其他减数分裂相关基因如scp3表达无明显影响；第8 d,处理组及对照组均未能观察到红色荧光,这与已有报道RA处理体外培养小鼠SSC可显著促进Scp3表达,并进入减数分裂I期偶线期的研究结果明显不同。在3D培养条件下,即用96孔球形低吸附微量培养板进行培养,48 h后细胞成球状体聚集生长,RA、 BMS493处理组、对照组在48 h后均观察到明显红色荧光,减数分裂相关基因表达与2D相比显著上调；第8 d与34 d,RA处理组减数分裂相关基因表达均显著高于对照组,而BMS493处理组低于对照组。综上,RA信号可抑制SG3增殖,促进其分化,但不是诱导细胞发生减数分裂的关键分子。本研究不仅为鱼类SSC分化相关研究提供了良好研究模型,而且促进了我们对于RA信号在鱼类SSC增殖与分化中作用的深入认识。