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1.
2.
【目的】干旱是严重影响玉米生长发育进程的一个重要因素。挖掘玉米抗旱相关基因,通过转基因功能验证和转录组分析,解析关键基因在响应干旱胁迫过程中的分子调控机制,为抗旱分子育种和遗传改良提供理论依据。【方法】以玉米自交系B104(WT)为背景材料,利用农杆菌介导方法构建过表达ZmIBH1-1转基因株系(ZmIBH1-1-OE);通过对转基因植株进行草铵膦抗性筛选、标记基因和目的基因PCR检测,以及运用实时荧光定量PCR检测目的基因的表达情况,鉴定阳性植株和株系;以WT和ZmIBH1-1-OE转基因株系为材料,通过干旱处理(20% PEG6000),进行表型鉴定和耐旱生理生化指标测定,验证ZmIBH1-1的抗旱功能;通过对干旱胁迫下玉米4叶期转录组的比较分析,鉴定出差异表达的基因(differentially expressed genes,DEGs);结合DAP-seq(DNA affinity purification sequencing)分析,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的下游靶基因,利用基因组可视化软件IGV(integrative genomics viewer)分析ZmIBH1-1蛋白结合候选靶基因的位置,然后通过Dual-Luciferase试验验证ZmIBH1-1蛋白与靶基因的调控关系。【结果】通过玉米遗传转化获得12个转化事件;T3代中,能同时检测到标记基因Bar和目的基因ZmIBH1-1的植株有458个,实时荧光定量PCR检测结果表明,ZmIBH1-1-OE中ZmIBH1-1的表达量显著高于WT,株系3和株系8表达量最高,将其自交获得T4代转基因株系用于后续试验。在干旱胁迫条件下,ZmIBH1-1-OE株系存活率、叶片相对含水量、叶绿素含量、可溶性蛋白含量及其生理生化指标(超氧化物歧化酶、过氧化物酶、过氧化氢酶活性)均显著高于WT,说明玉米中过量表达ZmIBH1-1赋予玉米更高的耐旱性。转录组分析结果表明,WT与ZmIBH1-1-OE株系在干旱胁迫下有1 214个差异表达基因;Gene Ontology(GO)功能富集分析结果表明,差异表达基因主要涉及生物过程、细胞组分和分子功能,如在生物过程中主要涉及到光合作用、应激响应、脱水响应等;KEGG富集分析表明,差异表达基因主要参与植物激素信号传导、新陈代谢等过程。结合转录组显著差异表达基因和DAP-Seq分析所得到ZmIBH1-1蛋白的靶基因,初步确定ZmIBH1-1蛋白直接调控与抗旱相关的11个候选靶基因,包括2个钙信号相关基因、3个半胱氨酸代谢相关基因、1个bHLH转录因子、1个应激响应蛋白、1个谷胱甘肽转移酶、1个氧化还原过程蛋白和2个乙烯响应因子;基因组可视化结果显示ZmIBH1-1蛋白可以结合靶基因启动子区;随后通过Dual-Luciferase试验进一步表明,ZmIBH1-1蛋白可以直接作用于11个候选靶基因,其中,ZmIBH1-1蛋白可以促进ZmCa-M、ZmSYCO、ZmbHLH54、ZmGlu-r1、ZmCLPB3和ZmP450-99A2的表达,抑制ZmAGD12、ZmCYS、ZmCYSB、ZmERF-107和ZmEIN3的表达。此外,在干旱胁迫下NAC、WRKY、MYB等转录因子在ZmIBH1-1-OE和WT株系中也存在差异表达。【结论】ZmIBH1-1的过表达可以增强玉米苗期的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控乙烯信号通路中的ZmERF-107和ZmEIN3的表达提高玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白通过直接调控钙信号相关基因ZmCa-M和ZmAGD12增强玉米的耐旱性;ZmIBH1-1蛋白可能通过间接调控NAC、WRKY、MYB等转录因子响应干旱胁迫。 相似文献
3.
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5.
本文通过研究绵羊瘤胃发酵、消化酶活性及瘤胃上皮组织中挥发性脂肪酸(VFA)吸收相关基因表达量,探讨胡麻饼代替豆粕对绵羊瘤胃代谢的影响。试验选取5月龄、体重为(26.0±1.0)kg的杜泊×小尾寒羊杂交F1代公羔24只,随机分为4组[对照(CK)、Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组],每组6只羊,分别饲喂胡麻饼代替豆粕的饲粮,胡麻饼添加比例分别为0、6%、12%和18%。试验结束后,屠宰并取样,采集瘤胃液和瘤胃组织,研究瘤胃液发酵参数、消化酶活性及瘤胃上皮组织VFA吸收相关基因的表达。预试期10 d,正试期60 d。结果表明:1)Ⅰ和Ⅱ组的平均日增重(ADG)与CK组无显著差异(P0.05),但显著高于Ⅲ组(P0.05);Ⅱ组的料重比(F/G)显著低于CK组(P0.05)。2)与CK组相比,Ⅱ和Ⅲ组的羟甲基纤维素酶、β-葡萄糖苷酶和蛋白酶的活性显著提高(P0.05),Ⅲ组木聚糖酶和果胶酶活性显著提高(P0.05)。3)与CK组相比,胡麻饼代替豆粕对绵羊瘤胃液p H、丙酸和乳酸浓度、乙丙比无显著影响(P0.05),但Ⅱ组乙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)的浓度显著提高(P0.05);Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组氨态氮(NH3-N)浓度均显著降低(P0.05),微生物蛋白(MCP)浓度显著提高(P0.05);4)与CK组相比,Ⅱ组单羧酸转运蛋白1(MCT1)和单羧酸转运蛋白4(MCT4)的mRNA相对表达量显著提高(P0.05),腺瘤下调蛋白(DRA)的mRNA相对表达量显著降低(P0.05);Ⅲ组Na+/H+交换蛋白(NHE3)的mRNA相对表达量显著提高(P0.05),MCT1、MCT4和DRA的mRNA相对表达量显著降低(P0.05);胡麻饼代替豆粕对阴离子交换蛋白2(AE2)的mRNA表达量无显著影响(P0.05)。综上,绵羊饲粮中一定比例的胡麻饼代替豆粕能够改善瘤胃代谢状况,在本试验条件下,饲粮中胡麻饼替代豆粕的适宜添加比例为12%。 相似文献
6.
"JD-三征肝泰"抗鸡脂肪肝综合征的药效学研究 总被引:2,自引:1,他引:1
300日龄"京白939"产蛋母鸡150只,随机分为5组,A组为健康组,B组为病理模型组,C组为JD-三征肝泰 组(剂量为每只鸡0.25g/d),D组为JD-三征肝泰 组(剂量为每只鸡0.5g/d);E组为氯化胆碱对照组(剂量为1g/kg饲料)。试验为期两周。结果显示:纯中药制剂JD-三征肝泰能显著降低肝脏脂肪含量和血清中TG、TC含量,减轻肝细胞水肿、坏死的病变程度,降低血清GPT、GOT活性。表明JD-三征肝泰对高脂饲料导致的鸡血脂升高和肝脏的脂肪变性具有明显抑制作用,同时对肝细胞损害有一定保护作用。 相似文献
7.
8.
武深秋 《农业工程技术:农产品加工》2004,(10):43
芽苗菜生产投资少、效益高、深受人们欢迎。但它栽培过程中常发生芽苗根部腐烂、红根、猝倒、子叶麻点霉烂以及根蛆等病虫害,给芽苗菜生产造成严重损失。 相似文献
9.
学生公寓是学生日常生活与学习的重要场所。近年来,一些高校因为自身条件的限制和生存发展的需要,纷纷兴建高层学生公寓。我校高层学生公寓的出现,是高校扩招的需要,也是市场经济的产物,它的存在有其一定的必然性与合理性。大批高层学生公寓的出现有效地缓解了学校发展的后勤保障压力,在为推进经济体制改革和教育产业的持续发展做出了一定贡献的同时,也给学生公寓管理工作带来了一系列问题。 相似文献
10.
2002年我市有近30%面积从8月中旬起,棉花中、上部显著落花、落蕾,开花果节位上抬,9月底~10月初在尚未见霜的情况下,大面积棉花发生早枯,单产较上年下降20%。 相似文献